[發明專利]一種艾塞那肽固相合成方法

無效

• 申請號: 201210504949.6
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN102942625A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 蘇賢斌;錢依冰;毛怡春;葉青;董海軍
• 申請（專利權）人: 南京工業大學;南京英沛生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）用固相合成方法由Fmoc-Ser(tBu)-OH和取代度為0.3-1.2mmol/g的氨基樹脂為起始原料，反應制得Fmoc-Ser(tBu)-氨基樹脂；

（2）Fmoc-Ser(tBu)-氨基樹脂在Fmoc脫保護試劑作用下脫去Fmoc后，在偶聯體系作用下于偶聯溶劑中依肽序依次連接Fmoc氨基酸以及至少一個氨基保護的Fmoc氨基酸或酰胺N上臨時取代的二肽，并在Fmoc脫保護試劑作用下依次脫去Fmoc，制得側鏈全保護的艾塞那肽氨基樹脂；

（3）對側鏈全保護的艾塞那肽氨基樹脂在裂解體系作用下裂解脫除側鏈保護基，冰乙醚沉淀，即得。

2.根據權利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（1）中，所述氨基樹脂為Rink?Amide樹脂、Rink?Amide-AM樹脂、Rink?Amide-MBHA樹脂或Sieber?Amide樹脂。

3.根據權利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（2）中，所述氨基保護的Fmoc氨基酸為2-羥基-4-甲氧基芐基、2,4-二甲氧基芐基或2,4,6-三甲氧基芐基保護的氨基酸，所述酰胺N上臨時取代的二肽為偽脯氨酸或酰胺N上臨時取代基為2-羥基-4-甲氧基芐基、2,4-二甲氧基芐基、2,4,6-三甲氧基芐基保護的二肽；其中，2-羥基-4-甲氧基芐基的結構式為2,4-二甲氧基芐基的結構式為2,4,6-三甲氧基芐基的結構式為

4.根據權利要求3所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：所述偽脯氨酸包括Fmoc-Gly-Thr(ψ^Me,MePro)-OH、Fmoc-Phe-Thr(ψ^Me,MePro)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-Ser(ψ^Me,MePro)-OH、Fmoc-Leu-Ser(ψ^Me,MePro)-OH、Fmoc-Pro-Ser(ψ^Me，MePro)-OH和Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ψ^Me,MePro)-OH。

5.根據權利要求3所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：所述2-羥基-4-甲氧基芐基、2,4-二甲氧基芐基或2,4,6-三甲氧基芐基保護的氨基酸包括Fmoc-(Hmb)Gly-OH、Fmoc-(Hmb)Leu-OH、Fmoc-(Hmb)Ala-OH；Fmoc-(Dmb)Gly-OH、Fmoc-(Dmb)Leu-OH、Fmoc-(Dmb)Ala-OH、Fmoc-(Tmb)Gly-OH、Fmoc-(Tmb)Leu-OH和Fmoc-(Tmb)Ala-OH。

6.根據權利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（2）中，偶聯溶劑為DCM，DMF或NMP中的任意一個或一個以上的組合；偶聯體系為HOBt、HOAt、HOOBt或Cl-HOBt中的任意一個或多個與DIC的組合，或為HOBt、HOAt、HOOBt或Cl-HOBt中的任意一個或多個與DPIEA或NMM中的任意一個或兩個與HBTU、HATU、PyBOP或PyAOP中的任意一個或多個的組合。

7.根據權利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（2）中，Fmoc脫保護試劑為哌啶，脫保護反應溫度為10-50℃，反應時間為5-60min，Fmoc脫保護試劑與偶聯溶劑的體積比為1:（3-5）。

8.根據權利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（3）中，所述裂解體系包括三氟乙酸、1,2-乙二硫醇、水和三異丙基硅烷的混合溶液，其體積比為（90-95）：（2-5）：（2-5）：（1-5）。

9.根據權利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（3）中，冰乙醚沉淀后，還包括純化步驟，具體為：將艾塞那肽溶于乙酸水溶液中，過濾，濾液經C18或C8柱梯度洗脫，流動相為水和乙腈，凍干，即得艾塞那肽。