[發(fā)明專利]一種艾塞那肽固相合成方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210504949.6
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN102942625A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇賢斌;錢依冰;毛怡春;葉青;董海軍
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué);南京英沛生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）用固相合成方法由Fmoc-Ser(tBu)-OH和取代度為0.3-1.2mmol/g的氨基樹脂為起始原料，反應(yīng)制得Fmoc-Ser(tBu)-氨基樹脂；

（2）Fmoc-Ser(tBu)-氨基樹脂在Fmoc脫保護(hù)試劑作用下脫去Fmoc后，在偶聯(lián)體系作用下于偶聯(lián)溶劑中依肽序依次連接Fmoc氨基酸以及至少一個氨基保護(hù)的Fmoc氨基酸或酰胺N上臨時取代的二肽，并在Fmoc脫保護(hù)試劑作用下依次脫去Fmoc，制得側(cè)鏈全保護(hù)的艾塞那肽氨基樹脂；

（3）對側(cè)鏈全保護(hù)的艾塞那肽氨基樹脂在裂解體系作用下裂解脫除側(cè)鏈保護(hù)基，冰乙醚沉淀，即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（1）中，所述氨基樹脂為Rink?Amide樹脂、Rink?Amide-AM樹脂、Rink?Amide-MBHA樹脂或Sieber?Amide樹脂。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（2）中，所述氨基保護(hù)的Fmoc氨基酸為2-羥基-4-甲氧基芐基、2,4-二甲氧基芐基或2,4,6-三甲氧基芐基保護(hù)的氨基酸，所述酰胺N上臨時取代的二肽為偽脯氨酸或酰胺N上臨時取代基為2-羥基-4-甲氧基芐基、2,4-二甲氧基芐基、2,4,6-三甲氧基芐基保護(hù)的二肽；其中，2-羥基-4-甲氧基芐基的結(jié)構(gòu)式為2,4-二甲氧基芐基的結(jié)構(gòu)式為2,4,6-三甲氧基芐基的結(jié)構(gòu)式為

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：所述偽脯氨酸包括Fmoc-Gly-Thr(ψ^Me,MePro)-OH、Fmoc-Phe-Thr(ψ^Me,MePro)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-Ser(ψ^Me,MePro)-OH、Fmoc-Leu-Ser(ψ^Me,MePro)-OH、Fmoc-Pro-Ser(ψ^Me，MePro)-OH和Fmoc-Ser(tBu)-Ser(ψ^Me,MePro)-OH。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：所述2-羥基-4-甲氧基芐基、2,4-二甲氧基芐基或2,4,6-三甲氧基芐基保護(hù)的氨基酸包括Fmoc-(Hmb)Gly-OH、Fmoc-(Hmb)Leu-OH、Fmoc-(Hmb)Ala-OH；Fmoc-(Dmb)Gly-OH、Fmoc-(Dmb)Leu-OH、Fmoc-(Dmb)Ala-OH、Fmoc-(Tmb)Gly-OH、Fmoc-(Tmb)Leu-OH和Fmoc-(Tmb)Ala-OH。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（2）中，偶聯(lián)溶劑為DCM，DMF或NMP中的任意一個或一個以上的組合；偶聯(lián)體系為HOBt、HOAt、HOOBt或Cl-HOBt中的任意一個或多個與DIC的組合，或為HOBt、HOAt、HOOBt或Cl-HOBt中的任意一個或多個與DPIEA或NMM中的任意一個或兩個與HBTU、HATU、PyBOP或PyAOP中的任意一個或多個的組合。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（2）中，F(xiàn)moc脫保護(hù)試劑為哌啶，脫保護(hù)反應(yīng)溫度為10-50℃，反應(yīng)時間為5-60min，F(xiàn)moc脫保護(hù)試劑與偶聯(lián)溶劑的體積比為1:（3-5）。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（3）中，所述裂解體系包括三氟乙酸、1,2-乙二硫醇、水和三異丙基硅烷的混合溶液，其體積比為（90-95）：（2-5）：（2-5）：（1-5）。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種艾塞那肽固相合成方法，其特征在于：步驟（3）中，冰乙醚沉淀后，還包括純化步驟，具體為：將艾塞那肽溶于乙酸水溶液中，過濾，濾液經(jīng)C18或C8柱梯度洗脫，流動相為水和乙腈，凍干，即得艾塞那肽。