[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫化氫的熒光探針及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210504410.0
• 申請(qǐng)日: 2012-11-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103160274A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐波;王栩;孫娟;馬曉旭;呂建政
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C09K11/06
• 分類(lèi)號(hào): C09K11/06;C07D209/12;G01N21/64
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

1.一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫化氫的熒光探針，其結(jié)構(gòu)式如下：

2.權(quán)利要求1所述的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫化氫的熒光探針的制備方法，其特征是，包括步驟如下：

（1）將Cy7熒光染料、乙酸鈉溶解在無(wú)水DMF中，在Ar氣保護(hù)下加熱回流2-4h，得到的混合物冷卻后抽濾，母液在-4～20℃低溫結(jié)晶，抽濾得酮式花菁紅棕色晶體；

（2）將鄰甲酰基苯甲酸、草酰氯溶解在無(wú)水CH₂Cl₂中然后加入少量DMF，在0℃攪拌2-6h，得鄰甲酰基苯甲酰氯；

（3）將酮式花菁、三乙胺溶于無(wú)水CH₂Cl₂，冷卻至0℃，逐滴加入鄰甲酰基苯甲酰氯并在0℃下攪拌10-30min，混合物加熱至室溫，攪拌過(guò)夜，抽濾，旋干，用色譜柱進(jìn)行分離，旋干得綠色固體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫化氫的熒光探針的制備方法，其特征是，步驟（1）中所述的Cy7熒光染料、乙酸鈉的質(zhì)量比為2.3：1；無(wú)水DMF用量為每克乙酸鈉用200-300毫升。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫化氫的熒光探針的制備方法，其特征是，步驟（2）中鄰甲酰基苯甲酸、草酰氯、無(wú)水CH₂Cl₂、DMF的用量比例為1.2~3.0：1.0~3.0：20~30：2~6，g：g：mL：μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫化氫的熒光探針的制備方法，其特征是，步驟（3）中酮式花菁、三乙胺、無(wú)水CH₂Cl₂、鄰甲酰基苯甲酰氯的用量比例為1.2~3.0：3~6：20~30：3~6，g：g：mL：g。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫化氫的熒光探針的制備方法，其特征是，步驟（3）所述的色譜柱分離洗脫劑為V_乙酸乙酯：V_甲醇=2:1。

7.權(quán)利要求1所述的熒光探針在檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)硫化氫中的應(yīng)用。

8.權(quán)利要求7所述的應(yīng)用方法，其特征是，用于活細(xì)胞內(nèi)硫化氫檢測(cè)：

（1）將含有熒光探針?lè)肿拥木彌_溶液5-10μM加入培養(yǎng)好的細(xì)胞放于培養(yǎng)箱中孵育8-12分鐘；

（2）將細(xì)胞用生理PBS緩沖液洗去多余的探針，然后進(jìn)行激光共聚焦顯微成像，如果是檢測(cè)內(nèi)源性的物質(zhì)，則是直接進(jìn)行共聚焦成像，如果是外加檢測(cè)物的，則是加了檢測(cè)物后，再次孵育12-16分鐘，進(jìn)行成像。