[發明專利]一種檢測黃曲霉毒素B1含量的非標記免疫分析方法

有效

• 申請號: 201210501665.1
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN103217528A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 李培武;李鑫;張奇;丁小霞;張文;張兆威;李冉
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

技術領域

本發明屬生物檢測領域，具體涉及一種檢測黃曲霉毒素B1含量的非標記免疫分析方法。?

背景技術

黃曲霉毒素是一類結構類似的化合物，自然界中的黃曲霉毒素主要是由黃曲霉菌和寄生曲霉產生的次級代謝產物。目前發現的黃曲霉毒素有二十余種，其中以黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1最為常見。黃曲霉毒素能對人及動物的肝臟組織產生破壞作用，嚴重時可導致肝癌甚至死亡。黃曲霉毒素被世界衛生組織劃定為Ⅰ類致癌物，以黃曲霉毒素B1毒性最強，其毒性是砒霜的68倍。?

黃曲霉毒素可發生在熱帶或亞熱帶地區的農產品出產過程中，同時在儲藏、運輸等環節也可能引入黃曲霉毒素的污染。花生是最易發現有黃曲霉毒素的農產品，其他如玉米、無花果、果仁及谷物都有可能受黃曲霉毒素污染。由于我國小農戶分散型的種植模式，農產品從農田到餐桌的各個環節都有可能受到黃曲霉毒素的污染。而黃曲霉毒素毒性大，危害嚴重，因此，世界各國對農產品中黃曲霉毒素的含量制定了嚴格的限量標準，成為控制農產品質量安全的關鍵環節。?

為了更有力地監測黃曲霉毒素含量，近年來分析檢測黃曲霉毒素的技術逐漸增多，靈敏度也逐漸提高。主要有儀器分析方法和免疫分析方法。免疫學方法克服了儀器方法費用高、操作條件要求高、對環境污染大等缺點，具有快速、簡便、特異性好、對操作人員和環境危害小等優點。基于免疫方法的試紙條層析技術和酶聯免疫試劑盒已被廣泛的應用于現場的定性和定量檢測。試紙條層析技術可在15min內實現檢測，但是只能進行定性分析，無法實現定量檢測；酶聯免疫試劑盒可進行定量檢測，但是耗時需幾個小時，操作步驟多。因此，研究建立一種簡單、快速、靈敏、可定量檢測黃曲霉毒素B1的方法對于快速、準確、在線監控農產品中黃曲霉毒素具有重要的意義。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術存在的不足而提供一種檢測黃曲霉毒素B1含量的非標記免疫分析方法。該方法可用于農產品中黃曲霉毒素B1檢測，與常規熒光和酶標記免疫分析方法相比具有無需標記的特點。?

本發明為解決上述技術問題所采用的技術方案為：?

一種檢測黃曲霉毒素B1含量的非標記免疫分析方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）提供待測樣品溶液，檢測待測樣品溶液在365nm激發波長激發下，加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11使黃曲霉毒素B1熒光充分淬滅前后的440nm處（熒光發射光譜中熒光強度最大處對應的波長）的熒光強度值，所述抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11由保藏號為CCTCC?NO：C201013的雜交瘤細胞株1C11產生；

（2）基于預先獲得的熒光被抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅強度與黃曲霉毒素B1濃度的關系曲線，由該待測樣品溶液的熒光被抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅強度值即加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅前后的440nm處的兩個熒光強度的差值，求得待測樣品溶液中黃曲霉毒素B1的含量。

該雜交瘤細胞株1C11已于2010年7月13日保藏于中國典型培養物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC?NO.?C201013。

按上述方案，所述的步驟（1）中黃曲霉毒素B1熒光充分淬滅后的440nm處的熒光強度值是在待測樣品溶液中加入適量抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11，使加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11后的待測樣品體系中抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11的濃度至少達到使體系中黃曲霉毒素B1的熒光充分淬滅的最小濃度，然后混勻，于37±5℃放置至少0.5h，再經365nm激發波長激發測試得到測得的。?

按上述方案，所述的熒光被抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅強度與黃曲霉毒素B1濃度的關系曲線是采用以下方法得到的：?

①配制得到一系列濃度的黃曲霉毒素B1標準品溶液，在365nm激發波長激發下獲得各濃度的黃曲霉毒素B1標準品溶液的熒光發射光譜，記錄440nm處的熒光強度值；