[發(fā)明專利]一種檢測黃曲霉毒素B1含量的非標(biāo)記免疫分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210501665.1
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN103217528A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李培武;李鑫;張奇;丁小霞;張文;張兆威;李冉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.一種檢測黃曲霉毒素B1含量的非標(biāo)記免疫分析方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）提供待測樣品溶液，檢測待測樣品溶液在365nm激發(fā)波長激發(fā)下，加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11使黃曲霉毒素B1熒光充分淬滅前后的440nm處的熒光強(qiáng)度值，所述抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11由保藏號為CCTCC?NO：C201013的雜交瘤細(xì)胞株1C11產(chǎn)生；

（2）基于預(yù)先獲得的熒光被抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅強(qiáng)度與黃曲霉毒素B1濃度的關(guān)系曲線，由該待測樣品溶液的熒光被抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅強(qiáng)度值即加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅前后的440nm處的兩個(gè)熒光強(qiáng)度的差值，求得待測樣品溶液中黃曲霉毒素B1的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的檢測黃曲霉毒素B1含量的非標(biāo)記免疫分析方法，其特征在于：所述的步驟（1）中黃曲霉毒素B1熒光充分淬滅后的440nm處的熒光強(qiáng)度值是在待測樣品溶液中加入適量抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11，使加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11后的待測樣品體系中抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11的濃度至少達(dá)到使體系中黃曲霉毒素B1的熒光充分淬滅的最小濃度，然后混勻，于37±5℃放置至少0.5h，再經(jīng)365nm激發(fā)波長激發(fā)測試得到測得的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的檢測黃曲霉毒素B1含量的非標(biāo)記免疫分析方法，其特征在于：步驟（2）所述的熒光被抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅強(qiáng)度與黃曲霉毒素B1濃度的關(guān)系曲線是采用以下方法得到的：

①配制得到一系列濃度的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在365nm激發(fā)波長激發(fā)下獲得各濃度的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的熒光發(fā)射光譜，記錄440nm處的熒光強(qiáng)度值；

②向上述各濃度的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液中加入等量的抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11，所述抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11由保藏號為CCTCC?NO：C201013的雜交瘤細(xì)胞株1C11產(chǎn)生，使加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11后的各濃度的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液體系中抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體的濃度至少達(dá)到使最大濃度黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的黃曲霉毒素B1的熒光充分淬滅的最小濃度，而使黃曲霉毒素B1熒光在抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11的作用下充分淬滅，然后在365nm激發(fā)波長激發(fā)下獲取各加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的熒光發(fā)射光譜，記錄440nm處的熒光強(qiáng)度值；

③經(jīng)擬合得到熒光被抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅強(qiáng)度與黃曲霉毒素B1濃度的關(guān)系曲線c（x，y）——x黃曲霉毒素B1濃度，y為熒光被抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11淬滅強(qiáng)度即加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體淬滅前后440nm處熒光強(qiáng)度的差值。

4.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的檢測黃曲霉毒素B1含量的非標(biāo)記免疫分析方法，其特征在于：所述步驟①中一系列濃度的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液是將黃曲霉毒素B1的甲醇儲(chǔ)備液稀釋配制得到的，濃度分別為10、7.5、5、3.5、2、1.5、1、0.75、0.5、0.3、0.1?ng/mL；所述各溶液的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液中加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11后的溶液體系中抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11的濃度為≥20?μg/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求4中所述的檢測黃曲霉毒素B1含量的非標(biāo)記免疫分析方法，其特征在于：所述步驟①中的稀釋液為磷酸鹽緩沖液，按下述方法配制：0.8g氯化鈉，0.29g十二水磷酸氫二鈉，0.02g氯化鉀，0.02g磷酸二氫鉀，加水定容至1000mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的檢測黃曲霉毒素B1含量的非標(biāo)記免疫分析方法，其特征在于：所述步驟②中為在各濃度的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液中加入抗黃曲霉毒素通用單克隆抗體1C11加入后混勻，并于37±5℃放置至少0.5h以使黃曲霉毒素B1熒光被充分淬滅，然后進(jìn)行后續(xù)步驟。