[發明專利]采用標簽蛋白人源化嵌合抗體作為陽性對照物的間接免疫檢測方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201210500268.2
• 申請日: 2012-11-29
• 公開（公告）號: CN102981002A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 任超;李全;焦守恕
• 申請（專利權）人: 同昕生物技術（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

1.一種采用標簽蛋白人源化嵌合抗體作為陽性對照物的間接免疫檢測方法，其步驟如下：

（1）針對要檢測的靶標抗體，制備用于反應的包被有重組目標抗原的固相載體，

（2）制備陽性對照，

（3）在所述固相載體上進行間接免疫檢測反應；

其特征在于：所述重組目標抗原指人工重組的帶標簽蛋白的目標抗原物，所述重組目標抗原中的目標抗原指能與所述靶標抗體特異性結合的抗原物；

所述陽性對照物采用抗重組目標抗原中的標簽蛋白的人源化嵌合抗體，

所述人源化嵌合抗體是指抗體Fc端由人的抗體基因編碼，抗體Fab端則由小鼠抗體的基因編碼，即將標簽蛋白的單克隆抗體的輕、重鏈可變區基因插入到含有人源抗體恒定區基因的表達載體中，轉入動物細胞中表達得到的標簽蛋白的人源化嵌合抗體。

2.根據權利要求1所述的間接免疫檢測方法，所述標簽蛋白的單克隆抗體指Flag、His、GST、GFP、myc或HA的單克隆抗體。

3.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述標簽蛋白人源化嵌合抗體指His人源化嵌合抗體或GST人源化嵌合抗體。

4.根據權利要求1~3任一所述的間接免疫檢測方法，其特征在于：所述陽性對照物溶于陽性對照稀釋液中。

5.用于權利要求1~4任一所述間接免疫檢測方法的試劑盒，包括用于承載檢測反應的固相載體和陽性對照物，其特征在于：

所述固相載體上包被有重組目標抗原，

所述重組目標抗原指人工重組的帶標簽蛋白的目標抗原物；

所述陽性對照物指抗重組目標抗原物中所帶標簽蛋白的人源化嵌合抗體，

所述人源化嵌合抗體是指：將標簽蛋白的單克隆抗體的輕、重鏈可變區基因插入到含有人源抗體恒定區基因的表達載體中，轉入動物細胞中表達得到的標簽蛋白人源化嵌合抗體。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，所述標簽蛋白的單克隆抗體指Flag、His、GST、GFP、myc或HA的單克隆抗體。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述標簽蛋白人源化嵌合抗體指His人源化嵌合抗體或GST人源化嵌合抗體。

8.根據權利要求5~7任一所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照物溶于陽性對照稀釋液中，所述陽性對照稀釋液的配方為：每1000ml溶液中含NaH₂PO₄·2H₂O?0.28g，

Na₂HPO₄·12H₂O?3.08g，NaCl?8.78g，牛血清白蛋白5～20g?Proclin300?0.5mL，Tween20

0.5mL，溶劑為純化水。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照物溶于陽性對照稀釋液中，所述陽性對照稀釋液的配方為：每1000ml溶液中含NaH₂PO₄·2H₂O?0.28g，Na₂HPO₄·12H₂O3.08g，NaCl?8.78g，牛血清白蛋白10g?Proclin300?0.5mL，Tween20?0.5mL，溶劑為純化水。

10.根據權利要求8任一所述的試劑盒，其特征在于，固相載體上包被重組目標抗原所用的封閉液為：每1000ml溶液中含有NaH₂PO₄·2H₂O?0.60g，Na₂HPO₄·12H₂O?5.80g，牛血清白蛋白BSA?5～20g，Proclin300?1mL，溶劑為純化水。