[發(fā)明專利]一種具有調(diào)節(jié)血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210499655.9
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN102964464A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王立;程素嬌;張暉;錢海峰;齊希光
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P3/10;A61P3/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：一種具有調(diào)節(jié)血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法，屬于功能性植物多糖提取技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：烏飯樹是一種藥食兼用的傳統(tǒng)植物資源，在我國分布廣泛。烏飯樹樹葉中含有如多糖、花色苷、黃酮、酚類、單寧等多種有效成分，具有改善血液微循環(huán)、抗?jié)儭⒖寡装Y、抗疲勞、抗衰老、抗腫瘤等多種藥理活性。

植物多糖是一類重要的大分子天然產(chǎn)物，具有多種生理功能，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、降血壓、抗凝血、降血糖和降血脂等，尤其是對糖尿病的預(yù)防和治療方面具有重要的作用。國內(nèi)外對于多糖降血糖方面的研究從未間斷，越來越多的活性多糖的降血糖功能被發(fā)掘。

糖尿病是一種以慢性高血糖為特征的代謝紊亂性疾病，已經(jīng)成為繼心血管和腫瘤之后的第三位“健康殺手”。楊文英教授等2010年3月25日發(fā)表于《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》——《中國人的糖尿病患病率》一文指出：在中國，9240萬20歲以上的成年人(9.7％的成年人口)患有糖尿病，并且糖尿病患病率正快速升高，呈現(xiàn)發(fā)病年輕化的趨勢。

以烏飯樹樹葉為原料，經(jīng)過粉碎、熱水水提、乙醇沉淀、大孔樹脂、凝膠色譜分離純化，最后用胰島β-細(xì)胞膜色譜柱進(jìn)行功能驗證，得到具有調(diào)節(jié)血糖活性的烏飯樹多糖。這將使烏飯樹這一傳統(tǒng)植物資源及我國豐富的功能性植物資源得到更大的開發(fā)利用。

發(fā)明內(nèi)容：本發(fā)明的目的是提供一種具有調(diào)節(jié)血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法，該方法工藝設(shè)計科學(xué)合理，能有效的分離純化具有調(diào)節(jié)血糖活性的多糖，提高了烏飯樹資源的開發(fā)利用，為植物多糖的開發(fā)提供了依據(jù)。

本發(fā)明的技術(shù)方案：以烏飯樹樹葉為原料，經(jīng)過粉碎、熱水水提、乙醇沉淀，再經(jīng)過大孔樹脂和凝膠色譜分離純化，最后用胰島β-細(xì)胞膜色譜柱驗證活性，得到具有調(diào)節(jié)血糖活性的烏飯樹多糖。

(1)原料粉碎：烏飯樹樹葉干燥，粉碎，過60-80目篩網(wǎng)，得到樹葉粉末；

(2)熱水提取：烏飯樹樹葉粉末加水，料液比控制在1∶40-1∶50，pH調(diào)節(jié)至9.0-9.5，溫度調(diào)節(jié)至60-65℃，浸提時間為2-3h，4000r/min離心15min，取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到濃縮液A；

(3)乙醇沉淀：濃縮液A與適量乙醇混合，調(diào)節(jié)至混合液中乙醇純度為75-85％，沉淀時間為6-7h，4000r/min離心15min，取沉淀，加水復(fù)溶，得到濃縮液B；

(4)大孔樹脂純化：濃縮液B上大孔吸附樹脂，先用2-3倍柱體積的去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用3-5倍柱體積的體積濃度為95％的酒精洗脫，收集洗脫液，濃縮至酒精含量不超過5％，得到濃縮液C；

(5)凝膠色譜純化：濃縮液上凝膠柱，收集分子量在80-100KDa范圍內(nèi)的洗脫液，濃縮得到濃縮液D；

(6)胰島β-細(xì)胞膜色譜柱驗證活性：以處理好的載體細(xì)胞膜作為胰島β-細(xì)胞膜色譜柱的固定相，流速為0.2mL/min，柱溫為37℃，流動相為硫酸銨緩沖液。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明工藝設(shè)計科學(xué)合理，操作簡便，能有效的分離純化具有調(diào)節(jié)血糖活性的多糖，提高了烏飯樹資源的開發(fā)利用。

具體實施方式

實施例1

取經(jīng)過干燥粉碎、過60目篩的50g烏飯樹樹葉粉末，加入2.0L水，調(diào)節(jié)pH至9.0，60℃下恒溫攪拌3h，提取液4000r/min離心15min，取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到濃縮液A；向濃縮液A中加入濃度為80％的乙醇調(diào)節(jié)最終乙醇濃度為75％，靜置沉淀7h，沉淀后4000r/min離心15min，將沉淀加水復(fù)溶得到濃縮液B；濃縮液B上AB-8型大孔吸附樹脂，先用2倍柱體積的去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用3倍柱體積的濃度為95％的酒精洗脫，收集洗脫液，濃縮至酒精含量不超過5％，得到濃縮液C；濃縮液C過ShodexOHPak?SB-g03HQ型色譜柱，收集分子量在80-100KDa范圍內(nèi)的洗脫液，濃縮后得到濃縮液D；以處理好的載體細(xì)胞膜作為胰島β-細(xì)胞膜色譜柱的固定相，用低壓濕法裝入色譜柱中，流速為0.2mL/min，柱溫為37℃，用硫酸銨緩沖液為流動相平衡3h后，加入濃縮液D驗證其具有調(diào)節(jié)血糖活性。

實施例2

取經(jīng)過干燥粉碎、過80目篩的50g烏飯樹樹葉粉末，加入2.5L水，調(diào)節(jié)pH至9.5，65℃下恒溫攪拌2h，水提后4000r/min離心15min，得到上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到濃縮液A；向濃縮液A中加入加入濃度為95％的乙醇調(diào)節(jié)最終乙醇濃度為85％，靜置沉淀6h，沉淀后4000r/min離心15min，將沉淀加水復(fù)溶得到濃縮液B；濃縮液B上D3520型大孔吸附樹脂，先用3倍柱體積的去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用5倍柱體積的體積濃度為95％的酒精洗脫，收集洗脫液，濃縮至酒精含量不超過5％，得到濃縮液C；濃縮液C過ShodexOHPakSB-803HQ型色譜柱，收集分子量在80-100KDa范圍內(nèi)的洗脫液，濃縮得到濃縮液D；以處理好的載體細(xì)胞膜作為胰島β-細(xì)胞膜色譜柱的固定相，用低壓濕法裝入色譜柱中，流速為0.2mL/min，柱溫為37℃，用硫酸銨緩沖液為流動相平衡3h后，加入濃縮液D驗證其具有調(diào)節(jié)血糖活性。