[發明專利]一種具有調節血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法

無效

• 申請號: 201210499655.9
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN102964464A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 王立;程素嬌;張暉;錢海峰;齊希光
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P3/10;A61P3/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種具有調節血糖活性烏飯樹多糖的提取純化方法，其特征是以烏飯樹樹葉為原料，經過粉碎、熱水水提、乙醇沉淀，再經過大孔樹脂和凝膠色譜分離純化，最后用胰島β-細胞膜色譜柱驗證活性，得到具有調節血糖活性的烏飯樹多糖；

具體工藝如下：

(1)原料粉碎：烏飯樹樹葉干燥，粉碎，過60-80目篩網，得到樹葉粉末；

(2)熱水提取：烏飯樹樹葉粉末加水，料液比控制在1∶40-1∶50，pH調節至9.0-9.5，溫度調節至60-65℃，浸提時間為2-3h，4000r/min離心15min，取上清液，旋轉蒸發濃縮得到濃縮液A；

(3)乙醇沉淀：濃縮液A與適量乙醇混合，調節至混合液中乙醇純度為75-85％，沉淀時間為6-7h，4000r/min離心15min，取沉淀，加水復溶，得到濃縮液B；

(4)大孔樹脂純化：濃縮液B上大孔吸附樹脂，先用2-3倍柱體積的去離子水洗脫，棄去洗脫液，再用3-5倍柱體積的體積濃度為95％的酒精洗脫，收集洗脫液，濃縮至酒精含量不超過5％，得到濃縮液C；

(5)凝膠色譜純化：濃縮液上凝膠柱，收集分子量在80-100KDa范圍內的洗脫液，濃縮得到濃縮液D；

(6)胰島β-細胞膜色譜柱驗證活性：以處理好的載體細胞膜作為胰島β-細胞膜色譜柱的固定相，流速為0.2mL/min，柱溫為37℃，流動相為硫酸銨緩沖液。

2.根據權利要求1所述的具有降血糖作用的烏飯樹多糖的提取方法，其特征是：(1)大孔樹脂是AB-8、D3520、D4020中的一種；(2)凝膠為Shodex?OHPak?SB-803HQ；(3)載體細胞膜的制備：在低溫反應管中加入硅膠作為細胞膜的載體，加入細胞膜懸浮液適量，反應2h后，加入生理鹽水，控制溫度為25℃，使凝脂雙層進行自身相互作用，最終在硅膠表面形成均勻的細胞膜，用Tris-HCl緩沖液洗滌。?