[發明專利]真菌葡寡糖鉻絡合物及其制備方法

無效

• 申請號: 201210498778.0
• 申請日: 2012-11-29
• 公開（公告）號: CN103059154A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 王寶琴;徐澤平
• 申請（專利權）人: 濱州學院;王寶琴
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C07H3/04;C07H3/06;C07H1/00;C12P19/22;C12P19/14;A61P3/10
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 苗峻

1.一種真菌葡寡糖鉻絡合物，其特征在于：寡糖鉻絡合物的配體化合物為真菌葡寡糖，真菌葡寡糖的重均分子量為300-3000Dalton，絡合物中的鉻含量為5-20wt%。

2.根據權利要求1所述的真菌寡糖鉻絡合物，其特征在于：配體寡糖為β-葡寡糖或α-葡寡糖，由小核菌葡聚糖或核盤菌多糖或茁霉多糖或水溶性酵母β-1,3-D-葡聚糖制得。

3.制備如權利要求1所述的真菌葡寡糖鉻絡合物的方法，其步驟如下：

（1）真菌葡寡糖的制備

用糖苷水解酶將小核菌葡聚糖或核盤菌多糖或茁霉多糖或水溶性酵母β-1,3-D-葡聚糖水解為葡寡糖，再用蛋白酶除雜，分別用不同截留分子量的超濾膜和納濾膜去除不需要的大分子和小分子，即得葡寡糖溶液，其濃度為7%-25%w/v；

（2）寡糖鉻的合成

將步驟（1）制備的寡糖溶液用堿液調節pH，使溶液的pH保持在8.5-13.2，加熱至溫度為40-80℃時滴加鉻化合物，期間添加堿液以保持上述的pH范圍，當溶液中剛開始出現綠色絮狀沉淀時，停止加入堿液和鉻化合物，反應液繼續在反應溫度下保溫1h；

（3）寡糖鉻的分離

用高分子量的超濾膜超濾，收集濾出液，再用低分子量的納濾膜超濾，收集截留液；所述高分子量的超濾膜是指截留分子量為6000-10000Dalton的超濾膜，所述低截留分子量的納濾膜是指截留分子量為100-300Dalton的納濾膜；

（4）寡糖鉻的純化

將步驟（3）所獲得的截留液，經柱層析進一步純化后，冷凍干燥或噴霧干燥即可。

4.根據權利要求3所述的真菌寡糖鉻絡合物的制備方法，其特征在于：步驟（1）真菌葡寡糖的制備方法具體如下：

雙酶法水解，將小核菌葡聚糖或核盤菌多糖或茁霉多糖或水溶性酵母β-1,3-D-葡聚糖溶于水，調節pH至4-5的范圍內，加熱至40-55℃，加入葡聚糖水解酶，保溫2-4h；調節pH至7-8的范圍內，加入蛋白酶，在40-60℃下保溫2-4h；升溫至90-100℃，滅酶活；離心，去除不溶物，用高截留分子量的超濾膜超濾，收集濾出液，再用低截留分子量的超濾膜超濾，收集截留液；即為所需分子量的葡寡糖；

所述的葡聚糖水解酶為糖苷水解酶，選自α-葡聚糖酶或β-葡聚糖酶或α-淀粉酶或β-淀粉酶或β-甘露聚糖酶或果膠酶或纖維素酶中的一種或數種的混合物；酶用量相對于葡寡糖的0.05-0.2%w/w；蛋白酶選自木瓜蛋白酶或菠蘿蛋白酶或堿性蛋白酶或蝸牛酶或胰蛋白酶或中性蛋白酶中的一種；酶用量相對于葡寡糖的0.05-0.2%w/w。

5.根據權利要求4所述的真菌寡糖鉻絡合物的制備方法，其特征在于：所述高分子量的超濾膜是指截留分子量為6000-10000Dalton的超濾膜，所述低截留分子量的納濾膜是指截留分子量為100-300Dalton的納濾膜。

6.根據權利要求4所述的真菌寡糖鉻絡合物的制備方法，其特征在于：制備高濃度葡寡糖溶液的投料方式為分批投料，投料次數為2-4次。

7.根據權利要求3所述的真菌寡糖鉻絡合物的制備方法，其特征在于：步驟（2）寡糖鉻的合成中所采用的調節反應液pH值的堿液為NaOH溶液或KOH溶液或Na₂CO₃溶液，濃度為0.5-5mol/L；所述鉻化合物為三價鉻化合物，選自氯化鉻或硫酸鉻或硝酸鉻或磷酸鉻或醋酸鉻。

8.根據權利要求3所述的真菌寡糖鉻絡合物的制備方法，其特征在于：步驟（2）寡糖鉻的合成過程中的pH值范圍為pH=8.5-12.5。

9.根據權利要求3所述的真菌寡糖鉻絡合物的制備方法，其特征在于：步驟（4）中所采用的層析柱，選自Sephadex-G25或Sephadex-G50的葡聚糖凝膠柱，DEAE?Sepharose-CL-4B或DEAE?Sepharose-CL-6B的瓊脂糖凝膠柱，或填料為60-800目硅膠粉的硅膠柱。