[發明專利]用Morpholino對其互補DNA進行保護的方法

無效

• 申請號: 201210497199.4
• 申請日: 2012-11-29
• 公開（公告）號: CN102943072A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 王康;夏興華;曹雷;王鳳彬;吉麗娜
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C07H1/00;C07H21/04
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓

1.一種用Morpholino對其互補DNA進行保護的方法，通過在金電極表面修飾Morpholino單鏈，再將該Morpholino單鏈同相應序列的DNA單鏈進行雜交，使其具有抗酶切保護作用。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將巰基修飾的Morpholino單鏈固定到金電極表面，然后用3-巰基丙醇封閉；

（2）將修飾好Morpholino單鏈的金電極放在含其互補DNA單鏈的雜交溶液中進行雜交。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟1為：對金電極進行預處理后放入以去離子水配制的0.5-1.5μM的MO-SH溶液中修飾25-35min，優選放入以去離子水配制的1μM的MO-SH溶液中修飾30min。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，將金電極先后用0.3μm、0.05μm的氧化鋁粉打磨后，用去離子水超聲清洗；用電化學方式拋光后，再次用去離子水洗凈，完成預處理。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1中，3-巰基丙醇濃度為0.8-1.5mM，封閉時間為0.5-1.5h；優選所述3-巰基丙醇濃度為1mM，封閉時間為1h。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述雜交溶液為DNA濃度為0.5-1.5μM的MgCl₂溶液，其中MgCl₂溶液的濃度為0.8-1.2M，雜交時間為3-5h；優選DNA濃度為1μM的MgCl₂溶液，其中MgCl₂溶液的濃度為1M；雜交時間為4h。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法在25-35℃恒溫水浴中進行。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法還包括檢測步驟，所述的檢測步驟為：在所述DNA單鏈上設置電化學活性基團亞甲基藍，將雙鏈修飾的金電極放入含有內切酶的電解質溶液中，用時間間隔掃循環伏安的方式，測定酶切動力學曲線。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述內切酶為脫氧核糖核酸Ⅰ型酶。