[發明專利]α和β地中海貧血基因檢測的核酸膜條及試劑盒

有效

• 申請號: 201210494748.2
• 申請日: 2012-11-28
• 公開（公告）號: CN102943115A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 劉福平;梁少明;劉晶晶;任維
• 申請（專利權）人: 亞能生物技術(深圳)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務所 44275
• 代理人: 張明

技術領域

本發明涉及地中海貧血的診斷試劑，尤其涉及一種α和β地中海貧血基因檢測的核酸膜條及試劑盒。?

背景技術

地中海貧血（Thalassemia，以下簡稱地貧）是由于病人某種或某些珠蛋白鏈合成速率降低，造成一些肽鏈缺乏，另一些肽鏈相對過多，出現肽鏈數量的不平衡而導致的溶血性貧血。地貧主要有兩種類型，分別為α-珠蛋白鏈合成減缺導致的α-地貧和β-珠蛋白合成減缺導致的β-地貧。?

α-地貧（包括缺失型α-地貧和非缺失型α-地貧）是世界上最常見的單基因遺傳病之一，我國南方的廣西、廣東、云南、海南、香港、臺灣等省市及其周邊地區也是本病的高發地區，全國29個省、市、自治區90萬人血紅蛋白病調查結果表明，人群中缺失型α-地貧的基因缺陷攜帶率為2.64%，其中廣西、廣東、江西、四川發病率分別高達14.95%、4.11%、2.60%、1.92%。我國的缺失型α-地貧在基因型上主要為-α^3.7、-α^4.2和--^SEA這三種缺失型，根據這三種缺失型在個體中的不同組合，可表現為靜止型、標準型、血紅蛋白H病（HbH病）和Hb?Bart’s胎兒水腫綜合癥這四種表現型。?

α-珠蛋白基因點突變類型是導致臨床α地貧漏診的主要原因之一，在我國南方非缺失型α-地貧的發病率也較高，廣西地區地中海貧血的流行病調查中發現Hb?CS和Hb?QS的發病率分別為1.21%和0.36%，可見非缺失型突變在Hb?H的基因缺陷中占較大比例，非缺失型α-地貧的突變大多位于功能較強的α2基因，故非缺失型Hb?H病人的臨床表現要比缺失型Hb?H病人更為嚴重，純合的非缺失α-地貧為嚴重的Hb?H病，此外，非缺失型α-地貧與缺失型α-地貧雙重雜合還可導致Hb?H胎兒水腫綜合癥。?

β-地貧在我國主要分布在廣東、廣西、云南、海南、臺灣、香港等省市及相鄰省區的部分地區。據報道在廣東β-地貧攜帶率為1.83%-3.36%，廣西和海?南甚至更高。β-地貧多由β-珠蛋白基因點突變所致，是我國南方各省最常見、危害最大的遺傳病之一。在中國人群中常見的突變位點有CD41-42，IVS-Ⅱ-654，-28，CD71-72等。?

目前常見的地貧基因檢測方法有Southern印跡雜交-限制性酶譜分析法、跨越斷裂點PCR（GAP-PCR）法、PCR-寡核苷酸探針（ASO）和PCR-反向點雜交（PCR-RDB）法等；生產廠家主要有亞能生物技術（深圳）有限公司、深圳益生堂生物企業有限公司、中山大學達安基因股份有限公司和潮州凱普生物化學有限公司等。國內臨床常用的方法為PCR-反向點雜交法、GAP-PCR法。現有主要產品見表1：?

表1?

上述方法中，跨越斷裂點PCR（GAP-PCR）法：通過一次PCR確定缺失突變形成的各種α地貧基因類型，已廣泛應用于產前基因診斷。但只能應用于缺失型α-地貧基因檢測產品，對于非缺失型α-地貧和β-地貧無法檢測。PCR-反向點雜交（PCR-Reverse?Dot?Blot，PCR-RDB）法：這一方法具有靈敏度高、特異性好和準確性高等優點，目前已廣泛應用于β-地貧的臨床基因診斷及正在研發階段的非缺失型α-地貧檢測。?

如申請號為200710074203.5的中國發明專利“診斷α-地中海貧血的核酸膜條及試劑盒”，申請號為200510034015.0的中國發明專利“用于診斷β-地中海貧血的核酸雜交膜條及試劑盒”。上述基因檢測試劑盒都分別單獨檢缺失型α-地貧或突變型β-地貧，雖然這些試劑盒檢測靈敏度高，檢出率高、特異度好，假陽性率和假陰性率低，在臨床診斷中得到了一定的推廣。但是由于這些產品操作要求條件高、方法繁瑣、耗時長、均為獨立檢測導致成本高昂，尚不能滿足臨床診斷簡便快速的要求。?

發明內容

本發明的目的在于提供共一種同時檢測缺失型α地貧、非缺失型α地貧和β地貧的核酸檢測膜條及試劑盒。?

本發明的技術方案為提供一種α和β地中海貧血基因檢測的核酸膜條，包括一基底，和固定于所述基底上的特異性寡核酸探針，所述特異性寡核苷酸探針包括：?

β-地中海貧血基因所對應的正常對照特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：1-7；?

α-地中海貧血基因所對應的正常對照特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：9-11；?