[發(fā)明專利]α和β地中海貧血基因檢測的核酸膜條及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210494748.2
• 申請日: 2012-11-28
• 公開（公告）號: CN102943115A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉福平;梁少明;劉晶晶;任維
• 申請（專利權(quán)）人: 亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275
• 代理人: 張明

1.α和β地中海貧血基因檢測的核酸膜條，包括一基底，和固定于所述基底上的特異性寡核酸探針，其特征在于，所述特異性寡核苷酸探針包括：

β-地中海貧血基因所對應(yīng)的正常對照特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：1-7；

α-地中海貧血基因所對應(yīng)的正常對照特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：9-11；

用于檢測β-地中海貧血基因的特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：12-19和SEQ?ID?NO：23-30；

用于檢測α-地中海貧血基因的特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID??NO：20-22、SEQ?ID?NO：31-33。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的α和β地中海貧血基因檢測的核酸膜條，其特征在于，所述基底為尼龍膜。

3.α和β地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

特異性擴(kuò)增非缺失型α-地中海貧血基因的一對引物：

引物ATF:SEQ?ID?NO：34；

引物ATR：SEQ?ID?NO：35；

特異性擴(kuò)增缺失型α-地中海貧血基因的三對引物：

引物3.7F：SEQ?ID?NO：36；

引物3.7R：SEQ?ID?NO：37；

引物4.2F：SEQ?ID?NO：38；

引物4,.2R：SEQ?ID?NO：39；

引物SEAF：SEQ?ID?NO：40；

引物SEAR：SEQ?ID?NO：41；

特異性擴(kuò)增β-地中海貧血基因兩對引物：

引物BF1：SEQ?ID?NO：42；

引物BR2：SEQ?ID?NO：43；

引物BF2：SEQ?ID?NO：44；

引物BR2：SEQ?ID?NO：45；

β-地中海貧血基因所對應(yīng)的正常對照特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：1-7；

α-地中海貧血基因所對應(yīng)的正常對照特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：9-11；

用于檢測β-地中海貧血基因的特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：12-19和SEQ?ID?NO：23-30；

用于檢測α-地中海貧血基因的特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ?ID?NO：20-22、SEQ?ID?NO：31-33。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的α和β地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，所述寡核苷酸探針固定在基底上。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的α和β地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，所述寡核苷酸探針固定在尼龍膜上。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的α和β地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，所述引物5’端標(biāo)記生物素。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的α和β地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，包括PCR反應(yīng)液I和PCR反應(yīng)液II，所述的PCR反應(yīng)液I各組分含量為：

去離子水：17.2μL；

10×PCR?buffer：2.5μL；

25mM?MgCl₂：0.5μL；

2.5mM?dNTP：2μL；

100μM引物3.7F：0.07μL；

100μM引物3.7R：0.07μL；

100μM引物4.2F：0.05μL；

100μM引物4.2R：0.05μL；

100μM引物SEAF：0.03μL；

100μM引物SEAR：0.03μL；

5U/μL超純Taq酶：0.5μL；

所述的PCR反應(yīng)液II各組分含量為：

去離子水：16.82μL；

10×PCR?buffer：2.5μL；

25mM?MgCl₂：0.5μL；

2.5mM?dATP、dCTP、dGTP、dUTP的等體積混合液：2μL；

100μM引物ATF：0.06μL；

100μM引物ATR：0.06μL；

100μM引物BF1：0.08μL；

100μM引物BR1：0.08μL；

100μM引物BF2：0.05μL；

100μM引物BR2：0.05μL；

1U/μL?UNG：0.3μL；

5U/μL?Taq酶：0.5μL。