[發明專利]一種提高水曲柳體細胞胚誘導率的方法

無效

• 申請號: 201210493495.7
• 申請日: 2012-11-28
• 公開（公告）號: CN102948369A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發明（設計）人: 楊玲
• 申請（專利權）人: 東北林業大學;楊玲
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 王艷萍

1.一種提高水曲柳體細胞胚誘導率的方法，其特征在于它按以下步驟實現：

一、取水曲柳成熟種子進行消毒處理，然后剝離出合子胚，切取合子胚的單片子葉接種到含1.0～2.0mg/L芐基腺嘌呤、2.5～5.0mg/L生長素、200～700mg/L酸性水解酪蛋白、75～125g/L蔗糖和6～7g/L瓊脂的誘導培養基中，在溫度為20～30℃、濕度為40％～70％、無光照的條件下培養2～4周，得胚性組織；

二、將胚性組織接種到含0～2.0mg/L芐基腺嘌呤、0～5.0mg/L生長素、200～700mg/L酸性水解酪蛋白、20～30g/L蔗糖和6～7g/L瓊脂的繼代培養基中，在溫度為20～30℃、濕度為40％～70％、無光照的條件下繼續培養2～4周，得各種不同發育時期的體細胞胚，即完成提高水曲柳體細胞胚誘導率的方法；

其中步驟一中誘導培養基為MS1/2培養基或WPM培養基，pH值均為5～6；

步驟一中生長素為2，4-二氯苯氧乙酸或萘乙酸；

步驟二中繼代培養基為MS1/2培養基或MS培養基，pH值均為5～6；

步驟二中生長素為2，4-二氯苯氧乙酸或萘乙酸。

2.根據權利要求1所述的一種提高水曲柳體細胞胚誘導率的方法，其特征在于步驟一中水曲柳成熟種子進行消毒處理的方法：剝除包被在種子外面的果皮，流水沖洗種子20～40min，然后在25～30℃的室溫下將種子在水中浸泡2～3天，每天換一次水；然后在超凈工作臺上用體積濃度為70％～80％的酒精浸泡種子30～120s，然后用體積濃度為2％～6％的NaClO溶液浸泡種子10～20min進行體表滅菌，再用無菌水沖洗浸泡后的種子3～7次。

3.根據權利要求1所述的一種提高水曲柳體細胞胚誘導率的方法，其特征在于步驟一中剝離出合子胚的方法：在超凈工作臺上用無菌解剖刀在成熟種子的胚根端切去1/3～1/2，用鑷子從切口處擠出成熟合子胚，切取成熟合子胚的單片子葉接種到誘導培養基上，且子葉內側附于培養基上。

4.根據權利要求1所述的一種提高水曲柳體細胞胚誘導率的方法，其特征在于步驟一中切取合子胚的單片子葉還可以接種到含1.0～2.0mg/L芐基腺嘌呤、2.5～5.0mg/L生長素、200～700mg/L酸性水解酪蛋白、20～30g/L蔗糖和55～140g/L甘露醇、6～7g/L瓊脂的誘導培養基中。

5.根據權利要求1所述的一種提高水曲柳體細胞胚誘導率的方法，其特征在于步驟二中在溫度為24℃、濕度為50％、無光照的條件下繼續培養3周，得各種不同發育時期的體細胞胚。