[發明專利]具有血管化能力的組織工程骨及其制備方法

無效

• 申請號: 201210488049.7
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN103007360A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 段春光;劉建;孟國林
• 申請（專利權）人: 段春光
• 主分類號: A61L27/54
• 分類號: A61L27/54;A61L27/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種具有血管化能力的組織工程骨的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：A1，VEGF、Ang-1基因質粒的獲取及擴增、純化；

A2，VEGF、Ang-1基因質粒與I型膠原混合溶液的制備；具體方法為：I型膠原蛋白粉末置于0.2mol/L醋酸溶液中，PH＝3.2，配成0.3wt％的I型膠原溶液，4℃中充分攪拌12h，以使其充分溶解；然后將得到的VEGF、Ang-1的質粒與I型膠原溶液混合，質粒濃度按照各20ug/ml配制；

A3，將上述獲得的支架材料在真空環境下置于所述的I型膠原混合溶液中抽吸4h，使原始支架孔洞中充分浸入I型膠原溶液；混合物于-80℃冷凍12h后，在真空凍干機中凍干48-72h以使孔洞中形成膠原海綿結構；37℃下用1％戊二醛溶液對膠原海綿結構進行交聯10min；用去離子水反復洗滌后置于凍干機中凍干，構建成具有雙基因修飾的新型人工骨。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A1中，擴增VEGF所用引物對為：

Primer1：GGAAGATCTATGAACTTTCTGCTGTCT；

Primer2：ACGCGTCGACCCGCCTCGGCTTGTCACA；

上游引物Primer1引入Bgl?II位點，下游引物Primer2引入Sal?I位點。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A1中，擴增Ang-1基因所用引物對為：首輪PCR引物：

primer3：AGAGGTCAGAAGAAAGGAGCAA；

primer4：GCCCGACAGTCAGTGGAGT；

第二輪PCR引物：

primer5：ATGACAGTTTTCCTTTCCTTTGC；

primer6：TCAAAAATCTAAAGGTCGAATCATC。

4.根據權利要求1-3任一所述的方法制備的具有血管化能力的組織工程骨。