[發明專利]一種從蓮蓬中提取多酚氧化酶的方法

有效

• 申請號: 201210487120.X
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN103013937A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 鄧澤元;謝汝朋
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術領域

本發明屬于天然食品和藥物提取技術領域，特別涉及一種多酚氧化酶的提取方法。

背景技術

多酚氧化酶（polyphenoloxidase,?PPO）是一種廣泛分布于真菌、植物、昆蟲以及哺乳動物的金屬蛋白酶。多酚氧化酶可分為三大類：單酚單氧化酶（酪氨酸酶tyrosinase）、雙酚氧化酶（兒茶酚氧化酶catechol?oxidse）和漆酶（laccase）。在這三大類多酚氧化酶中，兒茶酚酶主要分布在植物中，微生物中的多酚氧化酶主要包括漆酶和酪氨酸酶。在食品加工和果蔬生產中，多酚氧化酶是植物體氧化褐變的主要原因之一，對食品的變質有很大的損害作用。然而，從植物生理學角度考慮，多酚氧化酶在植物自防御系統里發揮重要作用，是其防御蟲害、菌害的關鍵因素。多酚氧化酶是酚類代謝系統的關鍵性酶，能催化酚類轉化成醌類，醌類與木質素構成保護性屏蔽而使細胞免受病菌的侵害，另外也可以通過形成醌類物質直接發揮抗病作用。目前，多酚氧化酶在黃瓜對黑星病的抗性，蘋果對輪紋病的抗性，香蕉對束頂病的抗性，檸檬對流膠病的抗性，甘薯對蔓割病的抗性，水稻對白葉枯病的抗性的研究中取得了較大的進展。這方面的發展無疑促進了多酚氧化酶取代部分農藥的發展，對環境保護和資源利用具有深遠意義。另外，在茶葉的加工過程中，多酚氧化酶發揮的作用尤為突出，除了少量的綠茶、黃茶以外，大部分的茶葉發酵加工都是基于多酚氧化酶的催化氧化作用。研究發現利用外源的多酚氧化酶對發酵過程中的茶葉進行處理，可以改善茶葉的風味和口感，明顯提高成茶的TF含量，減少TB含量。除此之外，多酚氧化酶在含酚廢水的處理、環境中酚類毒物的降解、飲料加工、食用和藥用菌生產、飼料工業及醫藥衛生等各個領域有著廣泛應用。而利用微生物發酵合成酪氨酸酶也已成為研制治療白癱風、帕金森病和老年癡呆癥等疾患藥物的努力方向。隨著科學技術的進步，多酚氧化酶的應用技術會越來越廣泛，這就對多酚氧化酶的提取純化技術提出了要求。

蓮（Nelumbo?nucifera,?Gaertn.），是多年生草本植物，分布于世界各地，尤其以中國、印度和日本的栽種面積最廣。我國是蓮生產面積最廣的國家，栽種區域主要分布于福建、江西、湖北和安徽等省份。蓮蓬，是蓮子生產過程中產生的副產物，一般被農戶或生產商丟棄，造成很大的資源損失和環境污染。蓮蓬富含多酚氧化酶，是多酚氧化酶的良好生物來源。蓮蓬的蛋白含量比較低，從蓮蓬中提取多酚氧化酶，減少了雜蛋白分離的難度。另外，提取過程中主要的干擾成分是一些水溶性的多酚或者生物堿成分，分子量較小，易于分離，這就保證了多酚氧化酶較高的提取率。這些優點是目前一些從果蔬或者發酵產物提取多酚氧化酶無法比擬的。該發明采用的方法提取所得的多酚氧化酶具有非常高的純度（97%以上），為其在生物醫藥等領域的利用提供了工業生產的可能。總之，這種多酚氧化酶的提取利用的方法具有較高的社會價值和經濟價值。

發明內容

本發明的目的是提供一種從蓮蓬中提取多酚氧化酶的方法。

本發明是通過以下技術方案實現的。

本發明所述的一種從蓮蓬中提取多酚氧化酶的方法，按如下步驟。

(1)提取緩沖溶液的制備：在0.1~1.0mol/L?pH?5.0~8.0的磷酸鹽緩沖液中加入Triton?X-100、聚乙二醇和NaCl等破壁劑制得提取緩沖溶液，使該提取緩沖溶液含Triton?X-100?0~5?g/100mL、聚乙二醇0~5?g/100mL、NaCl?0.1~2.0?g/100mL，2℃~5℃冷卻處理。