[發(fā)明專利]一種用于糖尿病自身抗體6項(xiàng)聯(lián)檢試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210486571.1
• 申請(qǐng)日: 2012-11-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102967704A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬偉民;張永頂;馬新民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市伯勞特生物制品有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 深圳市深佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于糖尿病自身抗體6項(xiàng)聯(lián)檢試劑盒。

背景技術(shù)

糖尿病（diabetes）是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點(diǎn)，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀，糖尿病（血糖）一旦控制不好會(huì)引發(fā)并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無(wú)法治愈。糖尿病已經(jīng)成為繼心腦血管、癌癥以外危害人類健康的第三大疾病。

臨床上根據(jù)病因和發(fā)病機(jī)制分為1型糖尿病(T₁DM)、2型糖尿病(T₂DM)及其他類型。T₁DM又稱免疫介導(dǎo)性糖尿病，它是由于自身免疫系統(tǒng)破壞胰島細(xì)胞，使胰島素的合成和分泌減少或完全缺乏的自身免疫性疾病；T₂DM主要是因?yàn)橐葝u素抵抗伴相對(duì)性胰島素不足而引起。LADA全稱為成人隱匿性免疫性糖尿病（latent?autoimmune?diabetes?in?adult,LADA），其介于1型糖尿病和2型糖尿病之間，屬于免疫介導(dǎo)型1型糖尿病的亞型，其患病率約占初診2型糖尿病患者的10%-15%（患病率是1型糖尿病的2倍），其中胰島B細(xì)胞功能衰退速度是2型糖尿病患者的3倍。由此可知，對(duì)糖尿病進(jìn)行準(zhǔn)確的分型是對(duì)其實(shí)施預(yù)防及治療的基本前提。檢測(cè)糖尿病患者自身抗體是對(duì)糖尿病進(jìn)行準(zhǔn)確分型的主要方法。目前確認(rèn)的糖尿病自身抗體包括胰島細(xì)胞抗體（ICA）、谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）、胰島素抗體（IAA）酪氨酸磷酸抗體(IA-2A)、羧基肽酶抗體（CPH-A）和鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白8抗體（ZnT8-A）等。

目前常用免疫組化法、免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、放射免疫法（RIA）檢測(cè)。但是上述方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)輔助設(shè)備的要求較高，且僅能檢測(cè)單一自身抗體，單一自身抗體檢測(cè)的敏感性僅為39%-68.8%。

免疫印跡(IB)法或稱蛋白免疫印跡試驗(yàn)（Western?Blot,WB）是目前國(guó)內(nèi)測(cè)定可提取性核抗原（ENA）多肽抗體的主要方法，因?yàn)樗Y(jié)合了聚丙烯酰凝膠電泳的高分辨率和免疫標(biāo)記技術(shù)的高特異性及敏感性的優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái)被衛(wèi)生部臨檢中心推薦為愛(ài)滋病等傳染性疾病的確認(rèn)試驗(yàn)。但將免疫印跡法用于糖尿病自身抗體6項(xiàng)聯(lián)檢在國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種用于糖尿病自身抗體6項(xiàng)聯(lián)檢試劑盒。本發(fā)明提供的試劑盒對(duì)T₁DM、T₂DM和正常人血清中ICA、GADA、IAA、IA-2ACPH-A和ZnT8-A等6種抗體聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)Ⅰ型糖尿病診斷有高度敏感性(可達(dá)98%)和特異性(可達(dá)99.6%)，為糖尿病的分型診斷提供高效、快捷的檢測(cè)手段。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種用于糖尿病自身抗體6項(xiàng)聯(lián)檢試劑盒，包括檢測(cè)印跡膜和標(biāo)準(zhǔn)帶；

檢測(cè)印跡膜依次包括起始帶、檢測(cè)帶和質(zhì)控帶；檢測(cè)帶轉(zhuǎn)印有胰島細(xì)胞抗原、酪氨酸磷酸酶抗原、谷氨酸脫羧酶抗原、鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白8抗原、羧基肽酶抗原、胰島素自身抗原；

標(biāo)準(zhǔn)帶的制備方法為：

取胰島細(xì)胞抗體、酪氨酸磷酸酶抗體、谷氨酸脫羧酶抗體、鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白8抗體、羧基肽酶抗體、胰島素自身抗體經(jīng)梯度不連續(xù)電泳后轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜，顯色后，獲得標(biāo)準(zhǔn)印跡膜，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)印跡膜上各陽(yáng)性區(qū)帶分別與起始帶、質(zhì)控帶的相對(duì)距離，獲得標(biāo)準(zhǔn)帶。

同一胰島細(xì)胞蛋白抗原因電泳時(shí)的微笑效應(yīng)（在電泳槽中心的抗原移動(dòng)速度大于兩邊），使相同的胰島細(xì)胞蛋白抗原帶不能在一條直線上，與標(biāo)準(zhǔn)帶比對(duì)時(shí)會(huì)造成結(jié)果誤判。本發(fā)明在制備試劑盒的過(guò)程中，利用梯度不連續(xù)電泳解決了這一難題，不僅保證了結(jié)果判斷的準(zhǔn)確性，而且也是大批量生產(chǎn)的前提。

ICA作為一類自身抗體，發(fā)現(xiàn)于1974年，當(dāng)時(shí)認(rèn)為與胰島的所有細(xì)胞均存在反應(yīng)，T₁DM兒童中，70%-80%在明確診斷時(shí)ICA為陽(yáng)性。ICA檢測(cè)是臨床上應(yīng)用較早的指標(biāo)，在多數(shù)試驗(yàn)室中采用免疫組化的方法來(lái)進(jìn)行測(cè)定，雖然具有一定的靈敏度和特異性，但由于受檢測(cè)方法學(xué)的限制，使檢測(cè)結(jié)果在不同的試驗(yàn)室中有一定差異。

Palmer等在1983年最先檢出IAA后，指出T₁DM自身免疫過(guò)程并非僅限于胰島細(xì)胞膜和胞漿抗原，胰島素分子作為抗原也參與T₁DM的自身免疫過(guò)程。