[發明專利]一種表皮細胞抑裂素及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210485772.X
• 申請日: 2012-11-26
• 公開（公告）號: CN102977203A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 金以豐;吳奇;馬曉艷;張太平;宣勤貴
• 申請（專利權）人: 南京必優康生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/18;C12Q1/02;A61K38/17;A61P17/06;A61P35/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 胡錫瑜

1.?一種表皮細胞抑裂素,其特征是從動物皮中分離純化，分子量為30000-50000。

2.權利要求1所述一種表皮細胞抑裂素的制備方法,其特征是由以下步驟構成:

???(1)、以新鮮洗凈的去油脂豬皮作為原料，通過絞肉機將豬皮制成肉皮糜;

???(.2)、以豬皮重量三倍的水作為提取液，加入肉皮糜中，通過膠體磨研磨成勻漿，在10℃以下攪拌2-3小時、過濾，濾渣再加入二倍體積水再攪拌2小時，合并二次濾液,4℃靜置過夜去除上層油脂;

???(3)、去油脂濾液通過截止分子量10000的超濾膜過濾，濃縮至起始體積的3%;

???(4)、將分子量大于10000的超濾保留液經30--80%乙醇沉淀，再溶解;

(5)、將上清液通過SP—Sepharose?F.F?陽離子交換層析柱，皮抑素交換在層析柱上，改變PH增加離子強度，皮抑素被洗脫。

3.根據.權利要求2所述一種表皮細胞抑裂素的制備方法,其特征是使用膠體磨研磨豬皮，使艱難勻漿的豬皮得到充分破碎。

4.權利要求1所述一種表皮細胞抑裂素的活性測定方法，其特征是用Hacat人胞培養方法測定皮抑素活性，在表皮細胞培養液中加入皮抑素，抑制表皮細胞的生長，以MTT法檢測皮抑素的抑制百分率，取皮抑素從微克水平，以倍比稀釋至納克水平甚至匹克水平，將每孔中蛋白質濃度對抑制率作圖得出上下平臺，取上下平臺的中值為活性點。

5.將抑制1%規定為一個微活性單位mu，每毫克蛋白質的活性單位為比活性（u/mg蛋白質)

權利要求1所述一種表皮細胞抑裂素在制備治療銀屑病藥物中的應用。

6.???權利要求1所述一種表皮細胞抑裂素在制備治療皮膚癌藥物中的應用。