[發明專利]一種豬Ⅰ型細環病毒TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201210485102.8
• 申請日: 2012-11-23
• 公開（公告）號: CN102998453A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 李中圣;羅鈞;陳善真;趙焱
• 申請（專利權）人: 廣東現代農業集團研究院有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

技術領域

本發明涉及獸醫技術領域，具體涉及一種豬Ⅰ型細環病毒TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒及其制備方法，建立TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒用于檢測豬血清中TTSuV1的抗體水平。

背景技術

輸血傳播病毒（Transufsion?Transmitted?Viurs，TTV）是一類無囊膜，二十面體，單股負鏈環狀DNA病毒，電鏡觀察病毒顆粒直徑約為30‐32nm。TTV首次由日本學者從一例未知病原的非甲—非戊型輸血后肝炎病人的血清中發現，隨后人們在非靈長類以及豬、牛、羊、犬，貓、家禽等多種家養及野生動物體內也發現了TTV的感染。2009年，國際病毒分類協會（ICTV）將豬的TTV劃分到指環病毒科（Anelloviridae）細環病毒屬（Iotatorquevirus），細環病毒屬進一步劃分為兩個種；豬Ⅰ型細環病毒（Torque?teno?sus?virus?Ⅰ，TTSuV1)和豬Ⅰ型細環病毒(Torque?teno?sus?virus?Ⅱ，TTSuV2）。作為一種較為新型的病毒，TTSuV2的致病機理知之甚少。2004年，McKeown對中國，愛荷華州，泰國，安大略，韓國，西班牙，魁北克和薩斯喀徹溫省這六個不同國家地區的154份豬血清進行檢測，TTSuV2陽性率可高達66.2%(102/154)。Aramouni等證實了TTSuV1與斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）和豬皮炎腎病綜合征(PDNS)之間有一定的聯系并發現TTSuV2與其他已知的豬病原體協同感染可以導致疾病加重。近年來，關于TTSuV1和TTSuV2的報道逐漸增多，TTSuV2的感染具有廣泛性和普遍性，這一特點引起了諸多科研工作者的關注。因此，加強對TTSuV2的流行病學調查，確定其抗原性點，對TTSuV2的防治有十分重要的意義。

目前，國內外對TTSuV1和TTSuV2的流行病學報道中，較為注重TTSuV2的感染情況，TTSuV2的感染似乎在增強PMWS和PDNS病癥方面起著更為重要的作用，目前已經有報道建立了TTSuV2抗體診斷的“阻斷ELISA法”。然而，在幾乎所有報道中，TTSuV1在豬血清中超過30%的檢出率（PCR方法）足以引起人們對TTSuV1危害的重視。國內外逐漸建立了TTSuV1病毒核酸診斷（PCR）的方法，尚無關于TTSuV1抗體診斷（ELISA）試劑盒的報道。

發明內容

為克服現有技術的缺陷，本發明的目的在于提供一種豬Ⅰ型細環病毒TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒，建立的TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒具有良好的重復性和穩定性，可以檢測豬血清中TTSuV1的抗體水平。

本發明的另一目的在于提供一種豬Ⅰ型細環病毒TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒的制備方法。

為實現上述目的本發明所采用的技術方案如下：

一種豬Ⅰ型細環病毒TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒，其包括用酵母表達的TTSuV1?ORF1a重組蛋白包被抗原包被的酶標板，以及用TTSuV1唯一結構蛋白ORF1作為免疫診斷抗原篩選出的標準陽性血清和標準陰性血清，其中用酵母表達的TTSuV1?ORF1a重組蛋白的序列為SEQ?ID?NO:1。

本發明中，所述的豬Ⅰ型細環病毒TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒，其還包括

1）HRP標記的兔抗豬二抗液：兔抗豬二抗與HRP保護液按照體積比為1﹕2000-3000的比例稀釋，用量為100μl；

2）抗體稀釋液：0.1%BSA1.0g加入PBS至1000ml，用量為100μl；

3）顯色液：50mg?TMB，10mL?DMSO，9.8g檸檬酸和1.2ml?30%H₂O₂加蒸餾水定容至1000ml，用量為100μl；

4）終止液：雙蒸水178.3mL和98%的濃硫酸21.7mL混合，用量為100μl。

優選的方案中，上述豬Ⅰ型細環病毒TTSuV1抗體間接ELISA診斷試劑盒還包括pH值為7.4，0.2g?KH₂PO₄，2.9g?Na₂HPO₄·12H₂O，8.0g?NaCl，0.2g?KCl，0.5mL?0.05%（V/V）Tween-20，加雙蒸水定容至100ml的洗脫液。