[發(fā)明專利]具核素成像、熒光成像與磁共振成像功能的載藥納米粒及其制法和用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210484246.1
• 申請日: 2012-11-23
• 公開（公告）號: CN102921022A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設計）人: 丁寅;陳洪淵;徐靜
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K49/12;A61K49/14;A61K49/18;A61K51/06;A61K51/08;A61K51/12;A61K9/14;A61K47/36;A61K47/38;A61K47/42;A61K103/00;A61K103/10
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 黃嘉棟

1.一種具核素成像、熒光成像與磁共振成像功能的載藥納米粒，粒徑為80-250nm，其特征是：它是由大分子單體和丙烯酸的共聚物包裹的氧化鐵磁流體的復合納米微粒表面標記有近紅外熒光染料和核素分子后進行交聯(lián)，最后進行載藥的具核素成像、熒光成像與磁共振成像功能的載藥納米粒，所述的大分子單體是殼聚糖、明膠、纖維素或酪蛋白。

2.根據(jù)權利要求1所述的載藥納米粒，其特征是：所述的氧化鐵磁流體是檸檬酸、聚乙烯醇、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮包裹的氧化鐵納米微粒，流體動力學半徑為5～20nm。

3.根據(jù)權利要求1所述的載藥納米粒，其特征是：所述的殼聚糖是脫乙酰度為80-95%的數(shù)均分子量為1-20萬的殼聚糖。

4.根據(jù)權利要求1所述的載藥納米粒，其特征是：所述的熒光染料是Cy5.5-NHS染料或異硫氰酸NIR-797染料。

5.根據(jù)權利要求1所述的載藥納米粒，其特征是：所述的標記有核素分子是標記有^99mTc或⁶⁴Cu。

6.根據(jù)權利要求1所述的載藥納米粒，其特征是：所述的載藥是載有順鉑藥物。

7.一種制備權利要求1所述載藥納米粒的方法，其特征是它包括如下步驟：

步驟1.?表面修飾的氧化鐵納米微粒的磁流體：通過共沉淀法、水熱法或熱分解法制備的檸檬酸、聚乙烯醇、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮包裹的氧化鐵納米微粒，流體動力學半徑5～20nm，得到產(chǎn)物；

步驟2.?大分子-單體對與表面修飾的氧化鐵納米微粒共聚合制備包裹有氧化鐵的復合納米微粒：將大分子單體殼聚糖、明膠、纖維素或酪蛋白溶于含有聚丙烯酸水溶液中，當體系變?yōu)榫嗲页吻逋该骱螅诔晽l件下加入計量的步驟1制備的磁流體，于氮氣氣氛下升溫至70-90℃，然后加入1%的K₂S₂O₈溶液引發(fā)丙烯酸的聚合，反應結束后，得到帶有淺藍色乳光的溶液，經(jīng)過濾后在截留分子量為12?kDa的透析袋中用蒸餾水透析24?h以除去剩余的單體和引發(fā)劑；

步驟3.?復合納米微粒表面標記近紅外熒光分子：

方法一：由步驟2制得的納米微粒分散在濃度為50?mM、pH?8.5的硼酸鹽緩沖溶液中?，?通過PD-10?column色譜柱，熒光染料Cy5.5-NHS溶解在二甲亞砜中，與Cy5.5-NHS的摩爾比為5:1，避光反應30分鐘；

方法二：由步驟2制得的納米微粒分散在濃度為50?mM、pH?8.5的硼酸鹽緩沖溶液中?，?通過PD-10?column色譜柱，然后將異硫氰酸NIR-797溶于二甲亞砜中，使其濃度為10?mg/mL，取0.1?mL染料溶液緩慢滴入2?mL調整過pH值（8.5）的納米微球溶液中，在37℃避光反應攪拌2?h，然后將溶液通過PD-10?column色譜柱純化納米微球；

步驟4.?復合納米微粒表面標記核素分子：

方法一：將二乙烯三胺五乙酸二酐（DTPA）溶于DMSO中，使其濃度為20?mg/mL，二乙烯三胺五乙酸二酐與表面修飾的氧化鐵納米微粒摩爾比為5:1,?避光反應過夜，然后將上述溶液通過PD-10?色譜柱,?并分散在pH=?7.4的PBS?緩沖溶液中，納米微球的放射性核素標記的方法如下：將氯化錫和^99mTcO4￣加入到標記了二乙烯三胺五乙酸二酐的納米微球的濃度為0.1?mol/L、pH=7.4的?PBS溶液中，在室溫下攪拌30?min，然后，將^99mTc-DTPA-納米粒子通過0.2μm注濾頭過濾，來純化得到的^99mTc標記的載藥納米微球；

方法二：將偶聯(lián)劑l，4，7,10-四氮雜環(huán)十二烷四乙酸（DOTA-NHS）溶解在DMSO中，DOTA與表面修飾的氧化鐵納米微粒摩爾比為5:1,?避光反應過夜，然后將上述溶液通過PD-10?色譜柱,?并分散在pH?7.4的PBS?緩沖溶液中，將⁶⁴CuCl₂(2?mCi)鹽酸溶液加入到標記了DOTA的納米微球的濃度為0.1?mol/L、pH=7.4的PBS溶液中，在室溫下攪拌30?min，然后，將⁶⁴Cu-DOTA-納米粒子通過0.2μm注濾頭過濾，來純化得到的⁶⁴Cu標記的載藥納米微球；

步驟5.?標記有核素分子和近紅外熒光分子的復合納米微粒的藥物負載：在雙標記的復合納米微球溶液中加入計算量的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和2，2'-（乙烯二氧）雙（乙胺）進行交聯(lián)反應，在室溫的條件下攪拌10?h后，將溶液放入截留分子量為12?kDa的透析袋中用蒸餾水透析24?h以除去未反應的交聯(lián)劑，然后將計算量的順鉑加入到交聯(lián)后的復合納米微球溶液中，使藥物濃度為1?mg/mL，并將其放入37℃搖床中攪拌2天，然后根據(jù)kataoka課題組的方法來除去沒有負載上的游離的順鉑，得到具核素成像、熒光成像與磁共振成像功能的載藥納米粒。

8.權利要求1所述的具核素成像、熒光成像與磁共振成像功能的載藥納米粒在制備抗腫瘤藥物中的應用。