[發明專利]庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802及其在制備姜黃素衍生物中的應用

有效

• 申請號: 201210478473.3
• 申請日: 2012-11-21
• 公開（公告）號: CN102965290A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 王普;張維宇;黃金;李軍;何秀娟
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P7/22;C12R1/84
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

（一）技術領域

本發明涉及一株新的姜黃素轉化菌株----庫德里阿茲威畢赤酵母?(Pichia?kudriavzevii)?ZJPH0802，及其在微生物轉化制備姜黃素衍生物中的應用。

（二）背景技術

姜黃素為橙黃色結晶粉末，味稍苦，難溶于水，溶于乙醇、丙二醇等有機溶劑，易溶于冰醋酸和堿性溶液，在堿性時呈紅褐色，在中性和酸性時呈黃色，是一種疏水性多酚化合物，有一個特殊的1,7-二芳基庚烷的基本骨架，由兩個鄰甲基化的酚及一個β-二酮組成，分子式為C₂₁H₂₀O₆。其中β-二酮結構有烯醇-酮互變異構，在酸性和中性溶液中主要以酮式(1)結構存在，而在堿性溶液中主要以烯醇式(2)結構穩定存在。

姜黃素的化學結構式為：

姜黃素具有抗氧化、抗炎、降血脂、抗動脈粥樣硬化、抗癌、抗HIV等生物活性，可用于治療皮膚病、糖尿病、風濕性關節炎、囊胞性纖維癥、艾滋病和多種癌癥等，且其分子量小、毒性低，具有良好的臨床應用潛力。但姜黃素的水溶性差、結構不穩定，使其在食品和醫藥領域中的應用受到限制，其選擇性低、藥效不持久、被機體吸收的能力差，導致其生物利用度低，這些不足限制了其臨床應用。目前許多學者合成了較多的姜黃素衍生物與類似物，并對它們的理化性質和生物活性進行檢測和評價，但利用微生物細胞轉化方法對姜黃素進行結構修飾的報道較少。Xing?Zhang等?采用在華根霉(Rhizopus?chinensis)培養液中直接加入姜黃素的生長培養轉化法得到姜黃素衍生物（Biocatalysis?and?Biotransformation,?September–December?2010;?28(5–6):?380–386)。本發明采用庫德里阿茲威畢赤酵母靜息細胞轉化方法，不僅有效提高了轉化率，還可有效地控制轉化液的組成，以適應底物轉化的最佳條件；同時減少培養基成分對生物轉化過程的影響，便于轉化產物的后續分離與提純。本發明的菌種易培養，含酶源細胞的制備成本低，并且姜黃素底物的轉化反應時間可大大縮短。采用生物轉化法進行天然產物的結構修飾具有選擇性好、特異性強等優點，且生物體系可產生多種性質與功能各異的酶，從而可催化姜黃素底物轉化生成具有不同取代方式的系列衍生物，有望從中找到活性更好或具有新結構的化合物，對于研究此類化合物的“構效關系”具有重要意義。

（三）發明內容

本發明目的是提供一株新的姜黃素微生物轉化菌株-----庫德里阿茲威畢赤酵母(Pichia?kudriavzevii)?ZJPH0802，以及利用該菌株轉化制備姜黃素衍生物的方法。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一株新的姜黃素微生物轉化菌株-----庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802?(Pichia?kudriavzevii?ZJPH0802)，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國武漢·武漢大學，保藏日期：2012年9月24日，保藏編號：CCTCC?M?2012373。

菌種來源：庫德里阿茲威畢赤酵母(Pichia?kudriavzevii)?ZJPH0802菌株系從采自杭州市浙江工業大學（朝暉校區）土樣中分離篩選獲得。

所述庫德里阿茲威畢赤酵母(Pichia?kudriavzevii)?ZJPH0802按如下步驟篩選獲得：

土樣采集→平板培養→菌種分離→斜面培養→種子培養→?

發酵培養?→生物轉化反應→液相色譜檢測產物→獲得目的菌株

所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802菌株的特征如下：

菌落形態：麥芽汁平板上30℃培養48?h，菌落呈不規則形狀，乳白色，表面干燥，粗糙，疏松，扁平，邊緣呈鋸齒狀。

細胞形態：卵圓型或香腸型、周邊出芽，有假菌絲，1~2個子囊孢子。

生理生化特征：可以利用的碳源有：D-葡萄糖、L-乳酸、琥珀酸、乙醇。不能利用的碳源有：D-木糖、L-阿拉伯糖、松三糖、麥芽糖、淀粉、木糖醇、纖維二糖、D-半乳糖、L-鼠李糖、水楊苷、L-山梨糖。可以利用的氮源有：L-賴氨酸、乙胺。不能利用的氮源有：硝酸鹽、亞硝酸鹽、肌酸、肌酸酐。