[發明專利]庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802及其在制備姜黃素衍生物中的應用

有效

• 申請號: 201210478473.3
• 申請日: 2012-11-21
• 公開（公告）號: CN102965290A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 王普;張維宇;黃金;李軍;何秀娟
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P7/22;C12R1/84
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.庫德里阿茲威畢赤酵母?(Pichia?kudriavzevii)?ZJPH0802，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國武漢·武漢大學，保藏日期2012年9月24日，保藏編號CCTCC?M?2012373。

2.一種權利要求1所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802在生物轉化制備姜黃素衍生物中的應用，其特征在于所述的應用為：以庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802發酵培養獲得的濕菌體為酶源，以姜黃素為底物，于磷酸緩沖液介質中進行轉化反應，反應結束后將轉化反應液進行后處理，獲得所述姜黃素衍生物。

3.如權利要求2所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802在生物轉化制備姜黃素衍生物中的應用，其特征在于所述磷酸緩沖液為pH值5.8~8.0磷酸緩沖液。

4.如權利要求2所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802在生物轉化制備姜黃素衍生物中的應用，其特征在于所述轉化反應液的后處理方法為：反應結束后，將轉化液離心，取上清液用乙酸乙酯萃取，將萃取液減壓蒸餾除去乙酸乙酯，取殘留物進行硅膠柱層析，TLC跟蹤檢測，收集R_f值為0.424或0.712時的洗脫液，蒸除溶劑，獲得所述姜黃素衍生物。

5.如權利要求2所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802在生物轉化制備姜黃素衍生物中的應用，其特征在于所述的應用為：在酶源，姜黃素，磷酸緩沖液構成的轉化體系中，以庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802發酵培養獲得的濕菌體為酶源，以姜黃素為底物，于pH值為5.8~8.0磷酸緩沖液的轉化體系中，在20~40℃、150~220?rpm條件下進行轉化反應，反應結束后，將轉化液離心，取上清液用乙酸乙酯萃取，將萃取液減壓蒸餾除去乙酸乙酯，取殘留物進行硅膠柱層析，TLC跟蹤檢測，收集R_f值為0.424或0.712時的洗脫液，蒸除溶劑，獲得所述姜黃素衍生物。

6.如權利要求5所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802在生物轉化制備姜黃素衍生物中的應用，其特征在于所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802發酵培養獲得的濕菌體的用量以菌體干重計為20~150?g/L轉化體系，所述姜黃素底物的初始濃度為20~250?mg/L轉化體系。

7.如權利要求5所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802在生物轉化制備姜黃素衍生物中的應用，其特征在于所述于pH值為5.8~8.0磷酸緩沖液的轉化體系中，在30℃、200?rpm條件下進行轉化反應，轉化反應時間為16?h。

8.如權利要求2~7之一所述庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802在生物轉化制備姜黃素衍生物中的應用，其特征在于所述酶源按如下方法制備：?

（1）斜面培養：將庫德里阿茲威畢赤酵母ZJPH0802接種至斜面培養基，30℃培養2~3天，獲得斜面菌種，所述斜面培養基的終濃度組成為每升麥芽汁中加入20?g瓊脂，自然pH值；

（2）種子培養：從斜面菌體挑選一環菌體接種至種子培養基中，在30℃、200?rpm培養16?h，獲得種子液；所述種子培養基終濃度組成為：葡萄糖15~40?g/L、酵母膏1~3?g/L、NH₄Cl?3~8?g/L、MgSO₄·7H₂O?0.1~0.5?g/L、KH₂PO_4?0.2~1.5?g/L、K₂HPO₄?0.2~1.5?g/L，pH?5~8，溶劑為水；

（3）發酵培養：以體積濃度5~15?%接種量將種子液接種到發酵培養基中，30℃、200?rpm發酵培養24?h，將發酵培養液離心，收集濕菌體，即獲得所述酶源；所述發酵培養基終濃度組成同步驟（2）所述種子培養基終濃度組成。