[發明專利]雙峰駝H-FABP蛋白基因、重組蛋白及其克隆方法

無效

• 申請號: 201210478253.0
• 申請日: 2012-11-22
• 公開（公告）號: CN103014003A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 陳鋼糧
• 申請（專利權）人: 新疆旺源駝奶實業有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/47;C12N15/10
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，是一種雙峰駝H-FABP蛋白基因、重組蛋白及其克隆方法。

背景技術

心型脂肪酸結合蛋白(heart?fatty?acid-binding?protein，H-FABP),又稱FABP3,?編碼該蛋白的基因是目前?FABPs家族中研究較多的一種類型?,?主要在心肌、骨骼肌和乳腺中表達。不同物種的H-FABP基因編碼區具有較高的同源性?,這不僅表現在所編碼的氨基酸上?,?還表現在?DNA序列上?,?其外顯子和內含子個數以及相應外顯子的大小相同?,?但物種間相應內含子大小差異較大。當前?,?已有多個物種的?H-?FABP基因被克隆和定位?,?其中人類的?H-FABP基因被定位在?1號染色體?p32～p33,?小鼠的?H-?FABP基因被定位于?4號染色體上?,?1999年?,Gerbens等通過與人?H-FABP基因的?cDNA噬菌斑雜交?,?分離出了含豬?H-FABP基因的γ2?噬菌體?,?確定了豬?H-FABP基因的結構特征?,?并初步將其定位在豬?6號染色體上。Zhang等對大鼠?H-?FABP基因進行了克隆和序列結構分析?,?表明大鼠?H-?FABP基因由?4個外顯子和?3個內含子組成?,共編碼?133個氨基酸?,?通過熒光原位雜交(FISH)技術將其定位于?5q36。

H-FABP較特異地存在于心肌組織中，紅骨骼肌?、主動脈壁的平滑肌細胞、內皮細胞?、胃腺體的壁細胞和睪丸間質細胞中亦有，少量存在于腎臟、白骨骼肌?、腎上腺、腦，但肝臟?、脂肪組織內無?H-FABP分布。心臟型脂肪酸結合蛋白約占心臟全部可溶性蛋白質的4％～8％。H-F?A?B?P與心肌細胞內的長鏈脂肪酸和有機化合物-輔酶A酯誘導體的疏水部分相結合?，將其從細胞質膜向酯化和氫化部位運輸?，從而進入能量代謝體系氧化分解最終生成三磷酸腺苷(?ATP?)，為心肌收縮提供能量，并調節脂肪酸對各種代謝酶、受體和細胞內信號傳導、基因表達的影響，保護細胞膜和酶不受高濃度游離脂肪酸及其C?o?A衍生物的影響：血管細胞內的H-FABP能與細胞色素?P450表氧化酶、脂氧化酶的產物結合調節血管張力。H-FABP的基因表達依賴于升高的脂肪酸代謝，許多生理實驗表明增加脂肪酸的攝入與代謝可引起H-FABP及其?mRNA表達升高；H-FABP蛋白及其mRNA的組織分布相平行。??

H-FABP能及早發現超急期AMI（急性心肌梗塞）患者。對于鑒別出需急診住院、冠狀動脈造影、介入治療的患者有很高的敏感性，尤其那些胸痛發病6h內的患者的早期診斷和預后判斷有很大幫助。H-FABP如與傳統的標記物cTnI、CK-MB結合起來一起檢測，早期檢測H-FABP，恢復期檢測cTnI?。有利于篩選出有心臟事件高風險的患者，不僅便于采取積極的治療策略，還可節約患者開支和實驗室資源，?H-FABP與cTnI合理互補監測也許是將來一種臨床診治缺血性心臟病的理想選擇。

在動物方面H-FABP基因遺傳變異方面的報道較少，至今尚未發現克隆獲得雙峰駝H-FABP基因編碼蛋白序列以及對動物H-FABP基因進化規律研究的報道。H-FABP在細胞內與脂肪酸結合，使細胞內外保持一定的脂肪酸濃度差，促進細胞攝取脂肪酸,因此,?通過對H-FABP從基因、蛋白質和抑制劑等多方面的研究,?必然會為心血管疾病的預防和治療帶來新的希望。

雙峰駝有較強的耐旱和沉積脂肪能力，尤其是在水草充足的季節，駝峰能在短時間內沉積大量脂肪，很適合進行脂類代謝研究。

發明內容

本發明提供了一種雙峰駝H-FABP蛋白基因、重組蛋白及其克隆方法，H-F?A?B?P是一種使細胞內外保持一定的脂肪酸濃度差，促進細胞攝取脂肪酸的蛋白質，克服了上述現有技術之不足，H-FABP能及早發現超急期AMI（急性心肌梗塞）患者。對于鑒別出需急診住院、冠狀動脈造影、介入治療的患者有很高的敏感性，尤其那些胸痛發病6h內的患者的早期診斷和預后判斷有很大幫助。

本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的：一種雙峰駝H-FABP蛋白基因，該基因的核苷酸序列具有SEQ?ID?NO.1所示的序列。

下面是對上述發明技術方案的進一步優化或/和改進：

上述基因的核苷酸序列具有SEQ?ID?NO.1中46-661位的序列。

本發明的技術方案之二是通過以下措施來實現的：一種雙峰駝H-FABP蛋白基因的重組蛋白。

下面是對上述發明技術方案之二的進一步優化或/和改進：

上述重組蛋白的氨基酸序列具有SEQ?ID?NO.2所示的序列。