[發明專利]雙峰駝H-FABP蛋白基因、重組蛋白及其克隆方法

無效

• 申請號: 201210478253.0
• 申請日: 2012-11-22
• 公開（公告）號: CN103014003A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 陳鋼糧
• 申請（專利權）人: 新疆旺源駝奶實業有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/47;C12N15/10
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

1.一種雙峰駝H-FABP蛋白基因，其特征在于該基因的核苷酸序列具有SEQ?ID?NO.1所示的序列。

2.根據權利要求1所述的雙峰駝H-FABP蛋白基因，其特征在于該基因的核苷酸序列具有SEQ?ID?NO.1中46-661位的序列。

3.一種含有權利要求1或2所述的雙峰駝H-FABP蛋白基因的重組蛋白。

4.根據權利要求3所述的重組蛋白，其特征在于該重組蛋白的氨基酸序列具有SEQ?ID?NO.2所示的序列。

5.根據權利要求3或4所述的重組蛋白，其特征在于該重組蛋白為具有SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。

6.根據權利要求3或4所述的重組蛋白，其特征在于通過設計一對引物從雙峰駝H-FABP蛋白中得到雙峰駝肌球蛋白基因，該引物對的核苷酸序列信息如下：

正引物，SEQ?ID?NO.3（正向）：5’-?ATGGTGGACGCGTTCGTGGGC-3’，

反引物，SEQ?ID?NO.4（反向）：Oligo?dT。

7.根據權利要求5所述的重組蛋白，其特征在于通過設計一對引物從雙峰駝H-FABP蛋白中得到雙峰駝肌球蛋白基因，該引物對的核苷酸序列信息如下：

正引物，SEQ?ID?NO.3（正向）：5’-?ATGGTGGACGCGTTCGTGGGC-3’，

反引物，SEQ?ID?NO.4（反向）：Oligo?dT。

8.一種根據權利要求1或2所述的雙峰駝H-FABP蛋白基因的克隆方法，其特征在于按下述步驟進行：

第一步，總RNA提取，采取雙峰駝組織樣品后，對組織樣品進行組織總RNA提取；

第二步，引物設計及合成，引物對的核苷酸序列信息如下：

正引物，SEQ?ID?NO.3（正向）：5’-?ATGGTGGACGCGTTCGTGGGC-3’，

反引物，SEQ?ID?NO.4（反向）：Oligo?dT；

第三步，RT-PCR擴增，利用反轉錄試劑盒對組織樣品中的蛋白基因進行反轉錄，并對待擴增的DNA片段進行RT-PCR擴增；

第四步，蛋白基因的克隆，首先對PCR擴增的DNA片段進行回收，然后將回收的DNA片段同T載體連接形成感受態細胞，將感受態細胞進行轉化培養成單菌落，取少量該單菌落進行PCR擴增，對擴增后的單菌落鑒別T載體上是否含有目的DNA片段，若有目的DNA片段，將單菌落放入培養基中進行過夜培養，最后對質粒進行回收。