[發明專利]禽蛋中卵黃高磷蛋白的提取及純化方法

無效

• 申請號: 201210475785.9
• 申請日: 2012-11-21
• 公開（公告）號: CN102936280A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 吳子健;王亮;呂瑜峰;李建穎;孫佩佩
• 申請（專利權）人: 天津商業大學
• 主分類號: C07K14/465
• 分類號: C07K14/465;C07K1/18
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 肖莉麗

1.一種禽蛋中卵黃高磷蛋白的提取及純化方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）取禽蛋中的卵黃去除水溶性物質，采用乙醇脫脂后，用高濃度鹽溶液浸提得到卵黃高磷蛋白粗品；

（2）利用陰離子交換層析法純化上述卵黃高磷蛋白粗品并除鹽，得到高純度的卵黃高磷蛋白。

2.根據權利要求1所述的卵黃高磷蛋白的提取及純化方法，其特征在于，所述卵黃去除水溶性物質的過程為：取禽蛋中的卵黃加入1-3倍體積（w/v）、溫度為1-10℃的去離子水，在1-10℃低速攪拌0.5-2h；然后在1-10℃、4000-6000×g離心10-30min，棄掉含有水溶性物質的上清液，取沉淀得到粗制卵黃脂蛋白。

3.根據權利要求2所述的卵黃高磷蛋白提取及純化工藝，其特征在于，所述乙醇脫脂的過程為：向粗制卵黃脂蛋白中加入3-6倍體積（w/v）的乙醇，3000-6000rpm均質1-5min，然后在1-10℃、4000-6000×g離心10-30min，取沉淀，重復上述脫脂過程1-3次，得到脫脂后的卵黃脂蛋白；所述乙醇的濃度為60-90%。

4.根據權利要求3所述的卵黃高磷蛋白的提取及純化方法，其特征在于，所述高濃度鹽溶液浸提的過程為：用5-15倍體積（w/v）、濃度為8-12%的鹽溶液浸提上述脫脂后的卵黃脂蛋白，并用HCl溶液調節pH值為3.0-7.0，于1-10℃攪拌0.5-2h，然后在1-10℃、4000-6000×g離心10-30min，棄沉淀取含有卵黃高磷蛋白的上清液，將含有卵黃高磷蛋白的上清液脫鹽凍干，得到卵黃高磷蛋白粗品。

5.根據權利要求4所述的卵黃高磷蛋白的提取及純化方法，其特征在于，所述鹽溶液為NaCl溶液或(NH₄)₂SO₄溶液。

6.根據權利要求1所述的卵黃高磷蛋白的提取及純化方法，其特征在于，所述陰離子交換層析法包括下述步驟：

a、將卵黃高磷蛋白粗品溶于pH值為5.0-7.0、20-50mmol/L含NaCl的平衡緩沖液，至卵黃高磷蛋白終濃度為10-50mg/mL，得到卵黃高磷蛋白溶液；

b、將上述卵黃高磷蛋白溶液以恒定流速加入裝有陰離子交換樹脂且已用所述平衡緩沖液平衡的層析柱內，然后再以所述平衡緩沖液洗脫層析柱；

c、采用pH值為5.0-7.0、20-50mmol/L含NaCl的洗脫液進行一步洗脫，收集洗脫峰，透析凍干后得到高純度的卵黃高磷蛋白；所述洗脫峰是指在pH值為5.0-7.0、20-50mmol/L且NaCl濃度為0.5-1.0mol/L的洗脫液下紫外吸收峰對應的流出液。

7.根據權利要求6所述的卵黃高磷蛋白的提取及純化方法，其特征在于，所述平衡緩沖液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀或乙酸-乙酸鈉緩沖液，所含NaCl的濃度為0.2-0.4mol/L。

8.根據權利要求6或7所述的卵黃高磷蛋白的提取及純化方法，其特征在于，所述洗脫液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀或乙酸-乙酸鈉緩沖液，所述洗脫液中NaCl的濃度為0.5-1.0mol/L。

9.根據權利要求8所述的卵黃高磷蛋白提取及純化工藝，其特征在于，所述陰離子交換樹脂為指交聯葡聚糖系、瓊脂糖系或大孔苯乙烯系。