[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的制備及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210472350.9
• 申請(qǐng)日: 2012-11-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102967706A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 顏梅;楚成超;葛慎光;葛磊;張彥;王盼盼;李偉平;李龍;李蒙;劉芳;劉偉艷;王衍虎;于京華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/574
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/574;G01N21/76;G01N33/531
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種檢測(cè)檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光傳感器的制備方法，其包括以下步驟：

（1）利用聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）制備流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光流通池；

（2）按照現(xiàn)有方法制備出碳量子點(diǎn)，碳包覆的四氧化三鐵，二氧化硅和空殼金納米粒子；

（3）將發(fā)光碳量子點(diǎn)修飾在碳包覆的四氧化三鐵上，然后將一抗修飾在表面；

（4）將空殼金納米粒子修飾在二氧化硅粒子上，然后將二抗和葡萄糖氧花酶修飾在空殼金粒子上；

（5）將制作好的化學(xué)發(fā)光傳感器結(jié)合流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光儀對(duì)免疫標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)。

2.本發(fā)明所述發(fā)光碳量子點(diǎn)修飾碳包覆四氧化三鐵及空殼金包覆二氧化硅的制備包括以下步驟：

（1）碳包覆四氧化三鐵的制備：將四氧化三鐵浸入到硝酸溶液中超聲10?min，后通過(guò)磁鐵的作用進(jìn)行分離，二次水沖洗，然后在5%的葡萄糖溶液中超聲10?min，二次水沖洗，最后四氧化三鐵的水溶液在高壓釜中以180?℃中反應(yīng)10?h；

（2）碳量子點(diǎn)的制備：在pH?7.0的磷酸緩沖溶液（PBS）中，以石墨電極為工作電極，銀/氯化銀電極為參考電極，鉑電極為對(duì)電極，在-3.0?V~3.0?V電壓范圍以0.1?V/s的掃速反應(yīng)24?h，離心分離，二次水沖洗；

（3）將（1）制備的碳包覆四氧化三鐵浸入到0.20%鄰苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯（PDDA）中攪拌20?min使其表面帶上正電，然后通過(guò)磁鐵的作用進(jìn)行分離，二次水沖洗；

（4）將（3）得到的碳包覆四氧化三鐵浸入到（2）得到的碳量子點(diǎn)溶液中并攪拌20?min形成一碳量子點(diǎn)層；

（5）重復(fù)以上（3）（4）過(guò)程可以得到需要的量子點(diǎn)層數(shù)；

（6）（5）中制得碳量子點(diǎn)包覆磁性粒子浸入到1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺（EDC）溶液中20?min，然后通過(guò)磁鐵的作用進(jìn)行分離，PBS沖洗后將一抗加入，反應(yīng)20?min，最后加入牛血清白蛋白（BSA）封閉活性位點(diǎn)，制備好的溶液保存在4?℃的冰箱中待用；

（7）二氧化硅的制備：將3?mL的正硅酸四乙酸（TEOS）加入到40?mL的乙醇中攪拌10?min得到TEOS的均勻溶液B，將4?mL的氨水加入到40?mL的乙醇中攪拌10?min得到氨水的均勻溶液A，將B液緩慢加入到A液中，攪拌12?h，離心分離，二次水沖洗；

（8）空殼金粒子的制備：在2.5mL?4.8mM的氯金酸中加入25?mL?10?mM四甲基溴化磷攪拌5?min，然后再加入0.2?mL?0.5?M的硼氫化鉀攪拌10?min，離心分離，二次水沖洗；

（9）將（7）制得的二氧化硅納米粒子浸入3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）中并攪拌1?h，離心分離，二次水沖洗；

（10）將（9）離心的二氧化硅浸入到（8）制得空殼金粒子中并攪拌1h，離心分離，二次水沖洗；

（11）將（10）制備粒子中加入二抗和葡萄糖氧化酶中30?min，最后用BSA?封閉活性位點(diǎn)，制備好的溶液保存在4℃的冰箱中待用；

（12）利用流動(dòng)注射在磁鐵的作用下依次注入修飾一抗的磁性粒子，抗原，修飾二抗的復(fù)合粒子，最后通入葡萄糖溶液和硝酸的混合溶液進(jìn)行化學(xué)發(fā)光的測(cè)定。