[發明專利]一種定量檢測TRECs和KRECs基因的實時熒光定量PCR試劑盒以及應用

有效

• 申請號: 201210470713.5
• 申請日: 2012-11-20
• 公開（公告）號: CN103173533A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 王曉川;劉丹如;王牧;房聰
• 申請（專利權）人: 無錫聯合利康臨床檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京泛誠知識產權代理有限公司 11298
• 代理人: 陳波;文琦

1.一種定量檢測TRECs和KRECs基因的實時熒光定量PCR試劑盒，其中包括DNA提取液、巢式PCR反應液、包含TRECs基因插入序列的標準品I、包含KRECs基因插入序列的標準品II、包含β-actin基因插入序列的標準品III、包含TRECs基因的實時熒光引物和探針的熒光PCR反應液I、包含KRECs基因的實時熒光引物和探針的熒光PCR反應液II和包含β-actin基因的實時熒光引物和探針的熒光PCR反應液III。

2.權利要求1所述的試劑盒，其中所述的巢式PCR反應液包括：

1）巢式PCR擴增TRECs基因的正向引物，其堿基序列如SEQNO:1所示；

2）巢式PCR擴增TRECs基因的反向引物，其堿基序列如SEQNO:2所示；

3）巢式PCR擴增KRECs基因的正向引物，其堿基序列如SEQNO:3所示；

4）巢式PCR擴增KRECs基因的反向引物，其堿基序列如SEQNO:4所示；

5）巢式PCR擴增β-actin基因的正向引物，其堿基序列如SEQ?NO:5所示；

6）巢式PCR擴增β-actin基因的反向引物，其堿基序列如SEQ?NO:6所示。

3.權利要求1所述的試劑盒，其中所述的熒光PCR反應液I包括：

1）實時熒光PCR檢測TRECs基因的正向引物，其堿基序列如SEQ?NO:7所示；

2）實時熒光PCR檢測TRECs基因的反向引物，其堿基序列如SEQNO:8所示；

3）用于檢測TRECs基因的探針，其堿基序列如SEQ?NO:9所示；

其中所述的熒光PCR反應液II包括：

1）實時熒光PCR檢測KRECs基因的正向引物，其堿基序列如SEQNO:10所示；

2）實時熒光PCR檢測KRECs基因的反向引物，其堿基序列如SEQNO:11所示；

3）用于檢測KRECs基因的探針，其堿基序列如SEQ?NO:12所示；

其中所述的熒光PCR反應液III包括：

1）實時熒光PCR檢測β-actin基因的正向引物，其堿基序列如SEQNO:13所示；

2）實時熒光PCR檢測β-actin基因的反向引物，其堿基序列如SEQNO:14所示；

3）用于檢測β-actin基因的探針，其堿基序列如SEQ?NO:15所示。

4.權利要求1所述的試劑盒，其中所述的標準品I，其堿基序列如SEQ?NO:16所示；其中所述的標準品II，其堿基序列如SEQ?NO:17所示；其中所述的標準品III，其堿基序列如SEQ?NO:18所示。

5.權利要求1至4所述的試劑盒，所述的特異性熒光探針為Taqman探針，標記探針5’端的為一種熒光發光基團，是FAM、VIC、TET、JOE、ROX、CY3、CY5、HEX中的一種；標記探針3’端的為一種熒光淬滅基團，是TAMRA、DABCYL、NFQ中的一種。

6.權利要求1至4所述的試劑盒，所述的Taqman探針5’端標記FAM或者VIC，3’端標記TAMRA。

7.權利要求1至6所述的試劑盒在新生兒T細胞及B細胞免疫缺陷檢測中的應用。