[發明專利]一種雷帕霉素/磁性羧甲基殼聚糖納米載藥微球的制備方法

有效

• 申請號: 201210470282.2
• 申請日: 2012-11-20
• 公開（公告）號: CN102961345A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 李桂銀;周治德;黃勇;操良麗;陳真誠
• 申請（專利權）人: 桂林電子科技大學
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K31/436;A61K47/36;A61K47/04;A61P37/06;A61P35/00
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司 45112
• 代理人: 巢雄輝

技術領域

本發明涉及一種生物功能材料在生物醫學領域中的應用，尤其涉及一種用磁性羧甲基殼聚糖固定雷帕霉素制成納米藥物微球的方法。

背景技術

雷帕霉素（RAPA），是從吸水鏈霉菌的發酵液中分離出來的一種新型大環內酯類免疫抑制劑。它不僅具有抗移植免疫排斥反應，而且對前列腺癌、腎癌、乳腺癌、結腸癌及肝癌等還具有較強的抑制作用。RAPA能夠通過抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian?target?of?rapamycin，mTOR)的蛋白激酶催化活性以及磷脂酰肌3激酶(phosphoinositide—3?kinase，PI3?K)／Akt信號轉導通路來調控基因表達、細胞生長和增殖，通過阻斷不同的細胞因子受體信號傳導，來阻斷T淋巴細胞及其它細胞由G1期至S期的進程，從而發揮其免疫抑制效應。然而，臨床給藥發現雷帕霉素存在水溶性低(2.6ug/mL)、靶向性差及局部濃度過高等問題，同時易伴隨骨髓抑制、高血脂、過度免疫抑制、腹瀉、頭疼等一系列的毒副反應，不利于連續化療。因此，RAPA的臨床應用受到了極大的限制。

為解決上述問題，開發新的分子靶向藥物載體已成為當下學者們研究的熱點，例如：S.?Jhunjhunwala,?G.?Raimondi,?A.W.?Thomson,?S.R.?Little.?Delivery?of?rapamycin?to?dendritic?cells?using?degradable?microparticles,?J.?Control?Release[J].133?(2009)?191-197，通過單乳化蒸發法得到粒徑為3.4μm的乳酸-羥基乙酸共聚物載雷帕霉素微米顆粒。此微球的平均粒徑為3.4±1.65μm，藥物包封率達73.95±5.43%，初步解決雷帕霉素的低水溶性和雷帕霉素的突釋等問題，但是仍然存在某些不足：比如制備的雷帕霉素載藥顆粒比較大，一方面阻礙了藥物在血管內的流通，另一方面易導致載藥微球被網狀內皮組織吞噬，達不到治療效果；載藥微球靶向性差，不能準確的將藥物定向輸送至病變部位，仍然無法解決其對正常組織的損傷，達不到最佳治療效果。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種靶向性強、載藥量高、粒徑較小、緩釋性能好的雷帕霉素/磁性羧甲基殼聚糖納米載藥微球顆粒的制備方法，該載藥微球顆粒具有超順磁性，對腫瘤細胞具有較強的殺傷能力。

為了解決這個技術問題，本發明采用的技術方案如下：

一種雷帕霉素/磁性羧甲基殼聚糖納米載藥微球的制備方法，包括如下步驟（未注明的用量和比例以質量計）：

1、制備磁性Fe₃O₄納米顆粒，備用：

（1）將七水硫酸亞鐵水溶液和PEG-20000水溶液混合，不斷攪拌下加一定濃度的稀氨水至pH值為9.5~10.5，溶液呈現墨綠色；

（2）逐步加入雙氧水溶液，使得溶液由墨綠色變為黑色；

（3）收集溶液并轉移至高壓反應釜，于160℃下恒溫5h；

（4）采用磁分離，收集下層沉淀；先后用蒸餾水和無水乙醇洗滌，然后采用真空干燥10~20小時，干燥完成后研磨得到磁性Fe₃O₄納米顆粒。

2、制備磁性羧甲基殼聚糖納米微球，備用：

（1）?????將磁性Fe₃O₄納米顆粒加到油相，攪拌分散均勻；

（2）?????將配好的羧甲基殼聚糖溶液作為水相緩慢加到油相中，攪拌混合均勻，得到混合液；

（3）?????向混合液中加入交聯劑并繼續攪拌反應一段時間；

（4）?????磁分離收集下層沉淀，先后用石油醚、丙酮洗滌，干燥得到磁性羧甲基殼聚糖納米微球；

3、制備雷帕霉素/磁性羧甲基殼聚糖納米載藥微球：

（1）將制得的磁性羧甲基殼聚糖納米微球配成一定濃度的水分散液作為水相；雷帕霉素溶于一定體積的乙腈液作為有機相；

（2）將有機相緩慢地加入水相中，攪拌10~20小時；

（3）先用超純水洗滌，然后用磁分離收集所得微球；重復超純水洗滌、磁分離步驟3-5次；

（4）將所得微球經冷凍干燥后粉碎，即得到粒徑為30±2nm的雷帕霉素/磁性羧甲基殼聚糖納米載藥微球。

步驟1中所述的水浴溫度優選30℃；所述稀氨水濃度優選8.3%（v/v）；所述雙氧水加入量優選0.27ml。