[發明專利]一種合成多肽及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201210469605.6
• 申請日: 2012-11-20
• 公開（公告）號: CN102924568A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 王盛楠;劉逸寒;柏桐
• 申請（專利權）人: 天津銘恒科技發展有限公司
• 主分類號: C07K5/103
• 分類號: C07K5/103;C07K1/06;C07K1/04;C12Q1/37
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物領域，具體涉及一種合成多肽及其制備方法和用途。?

背景技術

生物酶制劑自從被發現和利用以來，為人類做出了巨大的貢獻，蛋白酶被世界生物酶界公認為是使用最廣、技術較復雜的酶種，以堿性蛋白酶為代表的洗滌劑用酶一直占據酶制劑市場三分之一的份額，隨著蛋白類相關產品在人類日常生活中的重要性逐漸加強，蛋白酶在其他領域的應用被充分認識，應用領域不斷擴大。?

目前，在世界范圍內蛋白分解酶是工業酶種中應用得最多的一種酶，約占酶總量的60％。這類酶可廣泛應用于制革、絲綢、醫藥、食品和生物化學試劑等領域，在改善人民生活質量、降低勞動強度、節約原料和能源、保護環境等方面發揮著重要作用，并產生巨大的經濟效益和社會效益。在高技術日新月異的今天，蛋白酶在日用化工、食品、環保、醫藥及一些新興產業中更是具有巨大的市場潛力，發展前景極其廣闊，大力開蛋白酶的應用基礎研究及生產研究勢在必行。?

但由于自然界蛋白質底物的多樣性，造成蛋白酶品種眾多，根據菌種來源不同可分為：細菌蛋白酶、真菌蛋白酶等；根據提取來源不同可分為：木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、姜蛋白酶等；根據反應條件不同可分為：中性、堿性、酸性蛋白酶、低溫蛋白酶等；根據反應性能可分為：角蛋白酶、肽酶等，蛋白酶的多樣性造成酶的應用不同于淀粉酶類產品，相關應用技術更加復雜。?

國內酶制劑行業經過40年的發展，經歷了創建、繁榮的過程，同時也隨著國際先進的酶制劑公司諾維信和杰能科的進入而于上世紀90年代開始走向衰退。酶制劑行業是高技術和高壟斷的行業，國際上最大的酶制劑公司包括諾維信、杰能科兩家公司，目前占有國際市場的60％以上，在我國的占有率達到70％。導致這種局面的發生，部分原因是由于我國缺乏權威的檢驗評價方法。當國外產品進入國內市場時，國內外蛋白酶的分析檢測標準混亂不統一，嚴重限制了蛋白酶產品的推廣應用，產品檢測體系嚴重滯后導致魚龍混雜，難于評價產品優劣，催化功能相同的酶活力監測和表達方式不同，分類不明確。同時，我國及行業對于蛋白酶制劑標準又極不健全，整個行業缺乏必要的技術規范指導，嚴重影響產業提升，評價體系嚴重滯后導致魚龍混雜，難于評價產品優劣。隨著食品安全的日趨嚴格，作為添加劑的蛋白酶制劑產品，目前只有GB/T23527-2009《蛋白酶制劑》一個相關標準，不足以評價所有蛋白酶產品。因此，開發各種蛋白酶的標準底物及檢測方法，為建立健全各蛋白酶制劑的國家標?準或行業標準奠定基礎，既有利于規范蛋白酶制劑生產企業的生產管理，也將有利于提高蛋白酶制劑生產企業的生產技術水平，推動行業進步，為各生產企業、應用企業服務。當建成統一的國家標準或行業標準后，有利于各行業間的交流和蛋白酶制劑產品的市場開發應用。同時，可有效地規避競爭，提高競爭門檻，淘汰不符合標準的企業，提升整個行業的信譽。?

我國的酶制劑產品活力的測定，大都采用絕對法，在規定的條件下(反應溫度、時間、PpH)，以酶對底物水解的消耗速率或產物的生成速率進行定量，求得酶活力。因此，底物的質量就變的非常重要了。同一名稱的底物因不同產地、不同型號測定出的結果，有時會出現較大差異。?

通常，測定一種酶制劑的產品酶活力的檢測方法，對底物的選擇是經過反復試驗后才確定的。當前用于飼料的植酸酶、木聚糖酶、芽孢桿菌蛋白酶等酶制劑的酶活力底物均采用Sigma公司產品，雖然產品質量穩定，但是價格也是相當高。以N-Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA，N-Succinyl-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-L-phenylalanine4-nitroanilide等底物為例，250mg的售價在均在500以上。?

為了改善國內酶制劑行業檢測標準混亂的狀況，我們進行了大量的技術方案的設計和研究，設計一種新型的酶制劑檢測底物，用于快速高效檢測蛋白酶制劑的酶活性。?

發明內容

本發明的目的是提供一種全新的蛋白酶檢測底物，旨在提供一種高效快速檢測蛋白酶制劑酶活性的方法。?

本發明的另一個目的在于提供一種制備多肽的方法，為多肽的全合成提供一種簡單可行，費用低廉的方法。?

根據本發明的一個方面，提供一種全新的蛋白酶檢測底物，該底物為全合成多肽產品，序列如下：N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-對硝基苯胺。?

根據本發明的另一個方面，提供一種用于合成該專利目標多肽的全合成方法：采用標準Fmoc方案，選用2-HCl-Trt樹脂進行微波固相合成。?