[發(fā)明專利]一種合成多肽及其制備方法和用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210469605.6
• 申請(qǐng)日: 2012-11-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102924568A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王盛楠;劉逸寒;柏桐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津銘恒科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): C07K5/103
• 分類號(hào): C07K5/103;C07K1/06;C07K1/04;C12Q1/37
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種合成多肽產(chǎn)品，具有以下氨基酸序列特征：H2N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-OH。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽產(chǎn)品，是經(jīng)過(guò)以下步驟制備而來(lái)：

(1)樹(shù)脂上載

將取代度約0.5mmol/g的2-Cl-Trt樹(shù)脂5g置固相反應(yīng)管中，以含5％DIPEA的DCM溶液洗滌樹(shù)脂2次。將Fmoc-Phe-OH(5.142g，5.7mmol)溶于DCM(30ml)中，加入DIPEA(2.615ml，15mmol)，全部溶解后加入樹(shù)脂中，室溫?fù)u擺反應(yīng)2h，抽干后用DCM(30ml)洗滌樹(shù)脂3次，加入DCM-MeOH-DIPEA(17∶2∶1)混合液反應(yīng)30min封閉未反應(yīng)的樹(shù)脂，抽干后用DCM(30ml×2)、DMF(30ml×2)交替洗滌3次，最后用無(wú)水乙醚洗滌2次后抽干，紅外干燥后得樹(shù)脂9.873g，用UV-Fmoc方法測(cè)得上載后的取代度為0.62mmol/g，上載產(chǎn)率為98.4％。

(2)微波輔助脫除Fmoc保護(hù)基

將樹(shù)脂轉(zhuǎn)移至100ml微波反應(yīng)管中，加入含20％哌啶的DMF溶液30ml，氮?dú)夤呐荩⒉üβ?5W，溫度50℃，反應(yīng)時(shí)間3min。之后抽除反應(yīng)液，再加入含20％哌啶的DMF溶液30ml以相同微波條件再反應(yīng)1次，抽除反應(yīng)液后以DCM(30ml×2)、DMF(30ml×2)交替洗滌3次。

(3)微波輔助氨基酸縮合反應(yīng)

Fmoc保護(hù)氨基酸(10mmol)、HATU(3.147g，10mmol)和HOOBt(1.391g，10mmol)共同溶于DMF(30ml)中并加入DCM(5ml)，冰水浴冷卻至5℃，加入DIPEA(1.743ml，10mmol)后混合均勻反應(yīng)1min，將該反應(yīng)液加至脫除保護(hù)基后的樹(shù)脂中，通氮?dú)夤呐莼旌希⒉üβ?5W，時(shí)間5min，溫度50℃。之后抽干反應(yīng)液，以DCM(30ml×2)、DMF(30ml×2)交替洗滌3次，取少量樹(shù)脂以Kaiser方法檢測(cè)縮合情況，確認(rèn)結(jié)果為陰性后脫除Fmoc保護(hù)基。

(4)裂解樹(shù)脂制備H2N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-OH將完成所有縮合循環(huán)后的樹(shù)脂以DCM(30ml×2)、DMF(30ml×2)交替洗滌2次后轉(zhuǎn)至100ml茄形瓶中，以無(wú)水乙醚(30ml×3)洗滌，以帶有PP濾頭的聚四氟乙烯(PTFE)管抽干后置于紅外燈下充分干燥。向樹(shù)脂中加入TFA-苯甲硫醚-苯甲醚(90∶5∶5)(70ml)，氬氣保護(hù)下攪拌反應(yīng)2h。完畢后過(guò)濾，濾液緩慢滴至冰無(wú)水乙醚(2L)中，產(chǎn)生沉淀，離心(2500×g)3min，棄去上清液，沉淀再用無(wú)水乙醚攪拌-離心-棄上清重復(fù)操作5次，合并沉淀，置真空干燥箱中于40℃避光干燥6h，得類白色固體(6.264g，以樹(shù)脂計(jì)粗產(chǎn)率為89.7％)。