[發明專利]一種發酵生產多肽類抗生素那西肽的方法

有效

• 申請號: 201210469137.2
• 申請日: 2012-11-20
• 公開（公告）號: CN102965420A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 韓風華;李國棟;鄒君彪;鄧健;黃苓
• 申請（專利權）人: 江西興鼎科技有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12R1/465
• 代理公司: 江西省專利事務所 36100
• 代理人: 楊志宇

技術領域

本發明涉及的是一種發酵法生產多肽類抗生素那西肽的方法，屬于工業微生物技術、發酵工程、制藥工程領域。

背景技術

那西肽，又稱諾西肽，是一種新型綠色環保飼料添加劑，為動物專用抗生素，是由活躍鏈霉菌（Streptomyces?actuosus）發酵生產的含硫多肽類抗生素。對革蘭氏陽性菌有很強的抑制作用，通過抑制翻譯過程中的延長因子Tu和G來抑制革蘭氏陽性菌的生長，同時還抑制鳥苷三、四磷酸酶的合成。那西肽是一種黃色或黃綠色結晶，難溶于水，熔點310-320℃，分子式為C₅₁H₄₃N₁₃O₁₂S₆,元素組成為C：49.6%，H：4.0%，N：14.4%，O：16.7%，S：15.8%。其分子結構由五個噻唑環或還原噻唑環、一個吡啶環、一個吲哚環、一個蘇氨酸和一個谷氨酸組成，側鏈是一個脫氫丙氨酸。

那西肽被認定是一種新型的非吸收型的飼料添加劑，滿足對新飼用抗生素提出的八項要求，即：1、動物專用；2、只有抑菌作用而無殺菌作用；3、對革蘭氏陽性菌有效；4、不產生由R^-質粒所引起的耐藥性；5、有明顯的促進禽畜生產和改善飼料利用率的效果；6、不被消化道吸收，無殘留問題；7、對動物特別是對人安全性要高；8、對環境影響小。因此北美、法國、日本等國家已將那西肽開發為動物用抗生素，用于飼料添加劑。

1988年，上海醫科大學對那西肽進行立項研究，1998年6月獲得農業部頒發那西肽新獸藥證書（三類）（原料藥和預混劑）。并經中國獸藥監察所對那西肽樣品的檢測，產品質量與國外同類產品一直，目前那西肽已廣泛應用于我國飼料業。但我國那西肽發酵產量水平相對國外廠家來說偏低，影響經濟效益。

發明內容

本發明的目的是提供一種發酵法生產多肽類抗生素那西肽的方法，工藝過程簡單，生產成本低，產物保持活力，效價不易跌落。

一種發酵法生產多肽類抗生素那西肽的方法，技術方案如下：

（1）斜面培養：將在北京北納創聯生物技術研究院購買的CPCC600041-活力鏈霉菌，菌株保藏編號為CPCC?600041，接種到營養培養基中，進行斜面培養，得到產孢子的斜面；

（2）種子培養：將斜面孢子接種到種子培養基中，進行種子培養，得到種子液，種子液的固形物含量占種子液總量的20-30%；

（3）發酵培養：將種子液按10%接種量接種到發酵培養基中，進行發酵培養。發酵得到褐色發酵液，進行預處理后，過濾后菌絲體用酒精和正丁醇萃取，得到那西肽純品。

其中斜面培養時，斜面營養培養基組成成分為g/L：葡萄糖30.0-40.0，蛋白胨5.0-10.0，(NH₄)₂SO_4?0.5-1.0，CaCO₃?3.0-5.0，瓊脂20.0-30.0；培養基pH7.1-7.3，培養溫度25-32℃，培養周期6-10天。

其中種子培養時，用0.9%的生理鹽水將斜面上培養的孢子制成孢子懸液，接種到50ml種子培養基中，種子培養基組成成分為g/L：玉米漿20.0-40.0，蛋白胨10.0-20.0，蔗糖5.0-10.0，(NH₄)₂SO_4??1.0-2.0，CaCO₃?3.0-5.0；培養基pH6.8-7.2，培養溫度25-32℃，轉速200-220rpm，振幅3-5cm，培養周期40-48h。

發酵培養基組成成分為g/L：葡萄糖30.0-40.0，黃豆粉20.0-30.0，淀粉30.0-40.0，菜籽油5.0-10.0，Na₂SO₄?0.5-1.0，(NH₄)₂SO₄?1.0-2.0，NaCl?1.0-2.0，MgSO₄?0.3-0.5，MnSO₄?0.03-0.05，CaCO₃?3.0-5.0；培養基pH6.8-7.2，培養溫度25-32℃，轉速200-250rpm，振幅3-5cm，培養周期9-10天。

CPCC600041-活力鏈霉菌的信息來自于：http://www.mum800.com/p_5/p_82805.html

具體信息如下：

平臺資源號:?1511C0004000005925