[發明專利]一種海參用麥飯石載體抗嗜水氣單胞菌劑的制備方法

無效

• 申請號: 201210468662.2
• 申請日: 2012-11-16
• 公開（公告）號: CN103815164A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 謝克煥
• 申請（專利權）人: 大連德通生物技術開發有限公司
• 主分類號: A23K1/18
• 分類號: A23K1/18;A23K1/00;A23K1/14;A23K1/10;A23K1/16;A23K1/175
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技術領域

本發明主要涉及海產品疾病檢測技術領域，具體涉及海產品致病微生物防治營養粉，尤其是一種海參用麥飯石載體抗嗜水氣單胞菌劑的制備方法。

背景技術

我國海域遼闊，自然條件優越，海洋資源十分豐富。但目前開發利用的程度還很低。這也說明我國開發利用海洋資源的潛力巨大，遼寧海域是中國重要的海洋生物資源、漁業資源寶庫，其盛產海參、扇貝、貽貝、牡蠣和魚、蝦以及藻類等，帶動海洋經濟發展。加強多邊和雙邊的海洋開發國際合作，集中集約開發利用海域及海島資源，合理配置優勢海洋產業，科學高效開發海洋資源，積極開展科研與試驗、開發與利用，海水養殖標準化是合理開發海水養殖資源的重要手段，研究制定海產品養殖標準，合理開發海水灘涂養殖資源，提高養殖海產品疾病是當今養殖業的重點內容。

海產品養殖是一項高風險的養殖業，傳統的小戶的海產品養殖給養殖戶帶來了巨大的市場和技術風險。為了將養殖戶養殖風險降到最低，開展對各類養殖業，包括魚、蝦、蟹、海參、鮑魚、貝類、海藻等各類海產品的疾病防治工作任務舉足輕重。有報道稱，霍亂弧菌、漂浮弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、創傷弧菌等有害細菌，是引起海產品各種疾病的罪魁禍首。

世界海參養殖以刺參（溫帶種）和糙海參（熱帶種）為主要品種。除中國、日本、韓國主要養殖刺參外，其他國家均以糙海參為主要養殖對象。近年來，隨著自然資源的減少和消費需求的增加，海參的人工養殖在一些國家逐漸興起。其中，中國和日本是主要的養殖國家，印度、印度尼西亞、越南、菲律賓、韓國、埃及等也有小規模的增養殖。

刺參(Apostichopus?japonicus)是我國有記載的20余種食用海參中價值最高、惟一分布于黃渤海域的溫帶種。其蛋白質含量高,糖類豐富,脂類含量低,且不含膽固醇,具有很高的營養保健和藥用價值,被人們視為重要的海珍品,因而具有重要的市場價值。近年來,海參消費需求量的逐年增加導致了世界范圍內海參自然資源的過度開發和種群數量的急劇下降，因此，海參的人工養殖也隨之發展起來。隨之而來的是海參養殖中遇到的各類問題。

β-丙內酯(BPL)在國外已廣泛用于各種疫苗的滅活。β-丙內脂（C2H4O3）是一種雜環類化合物，沸點155℃，常溫下是無色粘稠狀液體，是廣譜殺菌劑，對病毒、細菌、真菌等都有很強的殺滅作用，比福爾馬林作用強25倍。作用機理：作用于病原體DNA或RNA，改變核酸結構達到滅活目的，而不直接作用于蛋白。1.特點：β-丙內酯(BPL)直接與核酸作用，而不作用于殼蛋白，不破壞病原體的免疫原性。2.大劑量β-丙內酯(BPL)雖是一種致癌物，但極易水解，在37℃水浴水解2h后消失，其水解為無毒性的脂肪代謝產物β-羥基丙酸。另外，由于其能在疫苗液體中完全水解，不必考慮在成品疫苗中的殘留。3.37℃僅需2小時β-丙內酯即可完全水解，滅活時間短，從而顯著地縮短了疫苗生產周期，提高了經濟效益。總之，β-丙內酯(BPL)作為疫苗滅活劑,可直接作用于核酸，滅活能力強，保持疫苗良好的免疫原性；其水解產物對機體無害，接種反應輕。目前，國內外已將其用于一些疫苗的滅活。

發明內容

由背景技術可見,提高刺參自身的免疫力,增強其抗病力是解決刺參病害問題的重要途徑。本研究為達到防治養殖業中海參患病的目的，避免在海參疾病防治中使用抗生素，本發明所述的海參用麥飯石載體抗嗜水氣單胞菌劑的制備方法，采用以下技術方案實現：其包括下述步驟：

向抗嗜水氣單胞菌劑中按照1:1~4的質量比加入麥飯石；其中，

抗嗜水氣單胞菌劑包括以下組分按質量份數配比組成，嗜水氣單胞菌滅活產物與營養飼料總重量比為1：2~10；

所述的嗜水氣單胞菌滅活產物由以下方法制備：

（1）增菌：從嗜水氣單胞菌標準菌株的單一菌落中，挑取一菌環，接種到普通LB培養基中，進行發酵，37℃培養12h制得發酵產物；將發酵產物再接入嗜水氣單胞菌培養基中進行發酵，32~37℃培養24~48h，至菌懸液菌含量的終濃度為10⁷~10¹⁰cfu/g；

（2）洗滌：將步驟（1）獲得的發酵產物，以1:50的質量比與PBS緩沖液混合，充分攪拌1~5min后，以4000~8000rpm轉數離心2~5min，以收集菌體；

（3）滅活處理：在收集的菌體中，按1:50的質量比加入PBS緩沖液，再向混合液體中，按1：1000~4000重量比加入β-丙內脂，100rmp振搖條件下，于4℃放置24h，然后于37℃放置2小時使其水解；