[發(fā)明專(zhuān)利]一種海參用麥飯石載體抗嗜水氣單胞菌劑的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210468662.2
• 申請(qǐng)日: 2012-11-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103815164A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝克煥
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 大連德通生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A23K1/18
• 分類(lèi)號(hào): A23K1/18;A23K1/00;A23K1/14;A23K1/10;A23K1/16;A23K1/175
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種海參用麥飯石載體抗嗜水氣單胞菌劑的制備方法，其特征在于，其包括下述步驟：

向抗嗜水氣單胞菌劑中按照1:1~4的質(zhì)量比加入麥飯石；其中，

抗嗜水氣單胞菌劑包括以下組分按質(zhì)量份數(shù)配比組成，嗜水氣單胞菌滅活產(chǎn)物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1：2~10；

所述的嗜水氣單胞菌滅活產(chǎn)物由以下方法制備：

（1）增菌：從嗜水氣單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的單一菌落中，挑取一菌環(huán)，接種到普通LB培養(yǎng)基中，進(jìn)行發(fā)酵，37℃培養(yǎng)12h制得發(fā)酵產(chǎn)物；將發(fā)酵產(chǎn)物再接入嗜水氣單胞菌培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，32~37℃培養(yǎng)24~48h，至菌懸液菌含量的終濃度為10⁷~10¹⁰cfu/g；

（2）洗滌：將步驟（1）獲得的發(fā)酵產(chǎn)物，以1:50的質(zhì)量比與PBS緩沖液混合，充分?jǐn)嚢?~5min后，以4000~8000rpm轉(zhuǎn)數(shù)離心2~5min，以收集菌體；

（3）滅活處理：在收集的菌體中，按1:50的質(zhì)量比加入PBS緩沖液，再向混合液體中，按1：1000~4000重量比加入β-丙內(nèi)脂，100rmp振搖條件下，于4℃放置24h，然后于37℃放置2小時(shí)使其水解；

（4）干燥：上述步驟（3）所得的滅活產(chǎn)物噴霧干燥到營(yíng)養(yǎng)飼料中，干燥24~36h，滅活產(chǎn)物與營(yíng)養(yǎng)飼料總重量比為1：2~10，產(chǎn)物水份含量為2~5%，制得海參用抗嗜水氣單胞菌營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑；

其中：所述的營(yíng)養(yǎng)飼料為：黃粉蟲(chóng)沙50～70份；馬尾藻粉：25～40份；海蒿子15～35；大豆蛋白10～15份；魚(yú)粉：5～10份；螺旋藻2～5份；貽貝粉2～5份；低聚殼聚糖：1～4份；復(fù)合多維1～4份；復(fù)合多礦1～4份；

（5）向步驟（4）所得到的抗嗜水氣單胞菌劑中，按照1:1~4的質(zhì)量比，加入麥飯石，充分混合均勻后球磨，球磨條件為：按10~30：1的質(zhì)量比裝入鋼球和沉淀物；球磨轉(zhuǎn)速設(shè)為350~450r/min，球磨時(shí)間為2~4h，使得終產(chǎn)物的產(chǎn)品粒度為納米級(jí)~微米級(jí)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的嗜水氣單胞菌培養(yǎng)基，其配制方法如下：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，葡萄糖5g，無(wú)需調(diào)節(jié)pH，121℃下滅菌20min；冷卻備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，按1：4000重量比加入β-丙內(nèi)脂。