[發(fā)明專(zhuān)利]避免纖維蛋白原降解的溶血栓液體制劑及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210466281.0
• 申請(qǐng)日: 2012-11-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103330706A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳文惠;嚴(yán)婷;蘇同偉;孔婷;陳佳捷;包斌;朱全剛;朱玉平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K31/407
• 分類(lèi)號(hào): A61K31/407;A61K47/04;A61K9/08;A61P7/02
• 代理公司: 上海天翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種避免纖維蛋白原降解的溶血栓液體制劑及其制備方法。

背景技術(shù)

血栓是指人體內(nèi)血液成分（凝血因子、血小板、纖維蛋白原）在血管或心臟內(nèi)形成的凝塊，栓塞是指在心臟或血管內(nèi)形成的血栓全部或部分脫落，隨血液流向遠(yuǎn)端而堵塞血管腔。血栓和栓塞等血栓性疾病是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病之一，它涉及到血液和循環(huán)系統(tǒng)的疾病，其致殘率和死亡率較高。近年來(lái)隨著對(duì)血栓病研究的深入，尋找和研制效果好、副作用小的血栓治療藥物是心腦血管疾病治療領(lǐng)域的核心內(nèi)容。

人體血液中的纖溶系統(tǒng)擔(dān)負(fù)著溶解血栓的作用,在血液循環(huán)中主要是防止纖維蛋白過(guò)度形成。溶栓藥物將纖溶酶原轉(zhuǎn)變成纖溶酶，纖溶酶降解構(gòu)成血栓的纖維蛋白，血栓溶解而消除血栓癥。

目前臨床應(yīng)用的纖溶藥物有兩大類(lèi)，其中一大類(lèi)是纖維蛋白非特異性溶栓藥物如鏈激酶和尿激酶等，它們?cè)谌芙饫w維蛋白的同時(shí)也降解血液中的纖維蛋白原，導(dǎo)致出血危險(xiǎn)性。另一大類(lèi)是纖維蛋白特異性溶栓藥物，主要以組織型纖溶酶原激活劑為代表，主要作用于血栓局部的纖維蛋白-纖溶酶原復(fù)合物，纖溶酶原被轉(zhuǎn)變成溶解血栓的纖溶酶而溶解血栓，但也可能導(dǎo)致局部組織或器官的出血危險(xiǎn)性。

近年來(lái)，隨著纖溶作用基礎(chǔ)理論研究的深入，針對(duì)溶血栓藥物導(dǎo)致出血危險(xiǎn)性的副作用，提出了通過(guò)小分子化合物激活血液中存在的纖溶酶原激活劑而作用于體內(nèi)的纖溶系統(tǒng)溶解血栓的新理論。其中，吳文惠等從海洋微生物長(zhǎng)孢葡萄穗霉（Stachybotrys?longispora?FG216）的代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了一種結(jié)構(gòu)式1的新型纖溶活性化合物FGFC1（Fungi?fibrinolytic?Compound?1）【吳文惠等.一種吡喃并異吲哚類(lèi)化合物及其制備方法和應(yīng)用.中國(guó)專(zhuān)利，申請(qǐng)?zhí)?01010174226.5,2010.5.14】，初步藥效學(xué)與毒理學(xué)研究表明其是一種安全、有效的溶血栓化合物，可通過(guò)靜脈注射達(dá)到優(yōu)良的溶血栓效果。進(jìn)一步的藥理學(xué)研究表明，小分子化合物FGFC1在溶解血栓同時(shí)還可克服目前溶血栓藥物由于降解血液中纖維蛋白原而引起的出血危險(xiǎn)性，是一種能避免纖維蛋白原降解的溶血栓藥物。

FGFC1為淡黃色粉末狀，具有難溶于水，其水溶液遇強(qiáng)光、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、氧化劑等均不穩(wěn)定，有效期較短的性質(zhì)。在體外溶栓體系中研究中表明，隨著FGFC1濃度的增加，其對(duì)于纖維蛋白原的降解有明顯的促進(jìn)作用，體外溶血栓相對(duì)活性明顯增強(qiáng)。

FGFC1的制備方法描述為下述的內(nèi)容。

（1）菌株Stachybotrys?longispora?FG216（CCTCC?NO:M2012272，中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，武漢）經(jīng)種子培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)、甲醇提取、HPLC分離（即高效液相色譜分離）、冷凍干燥步驟而得到FGFC1。

（2）所述種子培養(yǎng)步驟：接種斜面菌株FG216的種子培養(yǎng)基是改良的查氏培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基每1000ml人工海水中含有蔗糖50g、硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀0.1g、硫酸鎂0.5g、氯化鉀0.5g、酵母提取物1g、氯化鈷0.0025g、硫酸亞鐵0.015g、氯化鈣0.0065g，pH?5.8經(jīng)滅菌后使用。每1000ml人工海水含有氯化鈉24.72g、氯化鉀0.67g、氯化鈣1.36g、氯化鎂4.66g、硫酸鎂6.29g、碳酸氫鈉0.18g。

（3）所述發(fā)酵培養(yǎng)步驟：上述FG216種子培養(yǎng)液按照1-5%的接種量分別接種于含有改良的查氏培養(yǎng)基的三角瓶，在25-30℃、180-240r·min^-1的恒溫?fù)u床上培養(yǎng)4天后，添加培養(yǎng)基體積1%重量的鳥(niǎo)氨酸，培養(yǎng)24小時(shí)后，完成發(fā)酵培養(yǎng)。

（4）所述甲醇提取步驟：培養(yǎng)結(jié)束后，三角瓶中加入等體積的甲醇，超聲5-15min，在轉(zhuǎn)速10000rpm條件下離心10-15min，棄除沉淀，上清液40-60℃條件下減壓蒸餾蒸干，濃縮物真空干燥8-12h，干固物溶于少量甲醇，過(guò)濾棄除沉淀，收集上清液，再減壓濃縮真空干燥，所得干固物既為含有FGFC1的微生物代謝產(chǎn)物提取物。

（5）所述HPLC分離步驟：上述的微生物代謝產(chǎn)物提取物溶于甲醇，溶解后的溶液在流動(dòng)相甲醇和0.05M乙酸銨（70-85∶30-15）、流速8-10ml/min、檢測(cè)波長(zhǎng)265nm的條件下被色譜柱Sepax?HP-C18柱(21.2mm×250mm，10μm)分離出FGFC1。

（6）所述冷凍干燥步驟：分離化合物的洗脫峰部分在50-60℃被旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，經(jīng)冷凍干燥后得到純度為98%以上的FGFC1。

發(fā)明內(nèi)容