[發明專利]人源抗人表皮生長因子受體抗體及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201210465918.4
• 申請日: 2012-11-16
• 公開（公告）號: CN102993305A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 孫志偉;王雙;孫久如;張暢;曾大地;仇瑋祎;常紅艷;范志和;楊濤;范鐵炯
• 申請（專利權）人: 上海賽倫生物技術有限公司;中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K19/00;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;A61K39/395;A61P35/00;A61P29/00;A61P37/02;G01N33/53
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種人源抗人EGFR抗體，其特征在于，其輕鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?3所示的氨基酸序列。

2.如權利要求1所述的抗體，其特征在于，其輕鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?1和SEQ?ID?NO?2所示的氨基酸序列。

3.如權利要求1所述的抗體，其特征在于，其輕鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?7所示的氨基酸序列。

4.如權利要求1~3任一所述的抗體，其特征在于，其重鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?6所示的氨基酸序列。

5.如權利要求1~3任一所述的抗體，其特征在于，其重鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?5和SEQ?ID?NO?6所示的氨基酸序列。

6.如權利要求5所述的抗體，其特征在于，其重鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?4所示的氨基酸序列。

7.如權利要求5所述的抗體，其特征在于，其重鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?8所示的氨基酸序列。

8.如權利要求1所述的抗體，其特征在于，其輕鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?7所示的氨基酸序列，其重鏈可變區含有如SEQ?ID?NO?8所示的氨基酸序列。

9.如權利要求1~3或6~8任一所述的抗體，其特征在于，其為單鏈抗體、Fab、微型抗體、嵌合抗體或全抗體免疫球蛋白IgG1、IgG2、IgA、IgE、IgM、IgG4、IgD。

10.編碼權利要求1~9任一項所述抗體的基因。

11.如權利要求10所述的基因，其特征在于，編碼輕鏈可變區的基因其核苷酸序列為：

1）如SEQ?ID?NO?9所示的DNA序列；

2）在嚴格條件下與1）限定的DNA序列雜交且編碼所述輕鏈可變區的核苷酸序列；

3）與1）限定的DNA序列具有70％以上的同源性且編碼所述輕鏈可變區的核苷酸序列。

12.如權利要求10所述的基因，其特征在于，編碼重鏈可變區的基因其核苷酸序列為：

1）如SEQ?ID?NO?10所示的DNA序列；

2）在嚴格條件下與1）限定的DNA序列雜交且編碼所述重鏈可變區的核苷酸序列；

3）與1）限定的DNA序列具有70％以上的同源性且編碼所述重鏈可變區的核苷酸序列。

13.含有權利要求11和12所述基因的表達載體。

14.含有權利要求13所述表達載體的宿主菌、宿主細胞或表達盒。

15.如權利要求1~3或6~8任一所述的抗體，其特征在于，該抗體以至少約10-8M的親和力結合于人EGFR。

16.如權利要求1~3或6~8任一所述的抗體，其特征在于，該抗體抑制EGFR配體結合人EGFR。

17.如權利要求1~3或6~8任一所述的抗體，其特征在于，其結合于表達EGFR的細胞，但不誘導補體介導的細胞裂解；所述的細胞是人皮膚癌細胞、人肝癌細胞、人結腸癌細胞、人宮頸癌細胞、卵巢癌細胞、人肺癌細胞、膀胱癌細胞、乳腺癌細胞、腎癌細胞、前列腺癌細胞、頭頸部腫瘤鱗狀細胞、滑膜成纖維細胞或角質形成細胞。

18.制備權利要求1~9任一所述抗體的方法，其特征在于，利用噬菌體展示抗體庫技術篩選抗EGFR特異性單鏈抗體，獲得抗體輕鏈、重鏈可變區基因，并將其克隆入全抗體表達載體，通過哺乳動物表達系統或其他表達系統對其進行全抗體表達，獲得其全抗體蛋白。

19.權利要求1~9任一所述抗體在制備以EGFR為靶標的疾病治療藥物中的應用。

20.如權利要求19所述的應用，其特征在于，所述的藥物為抗腫瘤藥、抗炎藥物或治療自身免疫性疾病的藥物。

21.含有權利要求1~9任一項所述抗體的藥物或檢測試劑。

22.一種免疫毒素，包含以各種形式連接于細胞毒性劑的權利要求1~9任一所述的抗體。

23.如權利要求22所述的免疫毒素，其特征在于，所述的各種連接形式為抗體被標記、體外交聯或分子偶聯。