[發(fā)明專利]一種檢測鉻生物可利用度的微生物細胞傳感器

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210465602.5
• 申請日: 2012-11-19
• 公開（公告）號: CN102925401A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設計）人: 莊國強;侯啟會;馬安周;崔萌萌;王艷娟
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態(tài)環(huán)境研究中心
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12Q1/66;C12Q1/02;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種微生物細胞傳感器，由細菌作基本材料，通過基因工程手段構建，用來檢測水體和土壤中鉻的生物可利用度。

2.根據(jù)權利要求1所述的微生物細胞傳感器，其特征在于：大腸桿菌為宿主細胞。

3.根據(jù)權利要求1所述的微生物細胞傳感器，其特征在于：高靈敏度的螢火蟲熒光素酶luc為報告基因。

4.根據(jù)權利要求1所述的微生物細胞傳感器，其使用方法：

第一步：接種傳感器細胞單菌落于50mL三角瓶中，添加氨芐青霉素到終濃度為100μg/mL，37℃，200r·min^-1過夜培養(yǎng)；

第二步：取0.5mL的上述菌液到14.5mL的新鮮LB培養(yǎng)基中，37℃，200r·min^-1培養(yǎng)至OD₆₀₀＝1.2；

第三步：將菌液用新鮮LB培養(yǎng)基稀釋至OD₆₀₀＝0.4；

第四步：取50μL稀釋后的菌液分別與鉻標準溶液、待測樣品等體積混合，30℃靜置誘導；

第五步：將40μL空載體細胞與50μL誘導培養(yǎng)液混合，加入10μL1M?K₂HPO₄(pH7.8)和20mM?EDTA的裂解緩沖液，-70℃條件下快速冷凍混合物10min，然后23℃水浴細胞3min，最后加入300μL新鮮配制的裂解混合物(見附錄)，混勻后室溫孵育10min；

第六步：每個96孔板中加入20μL的裂解液，再加入100μL熒光素酶檢測液后，用熒光檢測儀立刻檢測；

第七步：根據(jù)標準樣品誘導下傳感器細胞的熒光值，制作熒光強度隨誘導物鉻濃度變化的標準曲線，利用標準曲線計算待測樣品的中鉻的相對濃度。

5.根據(jù)權利要求4所述的微生物細胞傳感器的使用方法，其特征在于：微生物細胞傳感器的培養(yǎng)溫度為37℃，微生物細胞傳感器的誘導溫度為30℃，熒光強度值運用熒光檢測儀進行采集和檢測。