[發(fā)明專利]一種直接測定糖化血紅蛋白比例的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210465460.2
• 申請日: 2012-11-16
• 公開（公告）號: CN103823071A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李元光;李獻紅;付鐵英;楊軼穎;何偉
• 申請（專利權(quán)）人: 北京怡成生物電子技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/72
• 分類號: G01N33/72;G01N27/26
• 代理公司: 北京三友知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11127
• 代理人: 丁香蘭;韓蕾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種測定糖化血紅蛋白比例的方法，無需測定血紅蛋白總量就能測算出血液中糖化血紅蛋白占血紅蛋白濃度百分比，更具體地說，本發(fā)明特別是一種將磁珠分離與酶電極檢測相結(jié)合的直接測定糖化血紅蛋白比例的方法。

背景技術(shù)

糖尿病是一組病因和發(fā)病機制尚未完全明了的內(nèi)分泌代謝疾病，目前發(fā)病率僅次于心血管疾病和腫瘤。根據(jù)醫(yī)學雜志《The?New?England?Journal?of?Medicine》(2010年3月份)報道，我國的糖尿病患者數(shù)目已達9200萬。目前臨床已廣泛開展檢測患者血糖工作，實現(xiàn)了醫(yī)院大型生化分析儀集中監(jiān)測和患者使用手持式血糖儀家庭式即時檢測的立體網(wǎng)絡(luò)。但是，血糖測定只是代表即刻的血糖水平，提示患者當時的身體狀況，并不能作為評價疾病控制程度的指標。

近車來，糖化血紅蛋白(HbA1C)的檢測日益受到臨床的高度重視。HbA1C是指血液中和葡萄糖結(jié)合了的那一部分血紅蛋白。血紅蛋白β亞基N端的纈氨酸的氨基與葡萄糖的自由醛基可逆縮合為醛亞胺(席夫堿)，而后醛亞胺發(fā)生Amadori重排反應(yīng)，形成較為穩(wěn)定的N末端果糖基結(jié)構(gòu)及順式二醇結(jié)構(gòu)單元。當血液中葡萄糖濃度較高時，人體所形成的糖化血紅蛋白含量也會較高。人體內(nèi)紅細胞的壽命一般為120天，在紅細胞死亡之前，血液中HbA1C含量也保持相對不變。因此HbA1C水平反應(yīng)了檢測前120天內(nèi)的平均血糖水平，而與取血時間、病人是否空腹及是否使用胰島素等因素無關(guān)，是判定糖尿病長期控制的良好指標。

常用的糖化血紅蛋白檢測方法有微柱法離子交換層析、親和層析、高壓液相、免疫凝集、離子捕獲法、電泳法等。但是這些檢測方法需用大型儀器，必須在醫(yī)院由專人進行檢測，結(jié)果需要數(shù)天才能反饋給醫(yī)生和患者，檢測極為不便，不能滿足即時檢測的需求。近年來，便攜式糖化血紅蛋白分析儀得到了很大發(fā)展，例如，美國Bayer公司的A1CNow+糖化血紅蛋白測定儀，該儀器利用兩條顯色試紙條及小型光學分析儀器檢測糖化血紅蛋白比例；美國Bio-Rad公司的in2it糖化血紅蛋白檢測儀，該儀器采用硼酸鹽親合色譜法檢測糖化血紅蛋白比例；挪威Nycocard?Reader?II分析儀，采用硼酸親合層析法檢測糖化血紅蛋白比例。這些方法一般需要進行血紅蛋白和糖化血紅蛋白兩個指標的分別測定，然后計算出糖化血紅蛋白的比例。多指標測定不僅使檢測設(shè)備復雜化、檢測成本升高；而且，每個指標的檢測誤差會累積傳遞到最終檢測結(jié)果的誤差中，導致最終結(jié)果的準確度難以提高。

因此，需要對現(xiàn)有的測定糖化血紅蛋白比例的方法進行改進，簡化操作，并提高測定結(jié)果的精確度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的在于提供一種新穎的測定糖化血紅蛋白比例的方法，無需測定血紅蛋白總量就能測算出血液中糖化血紅蛋白占血紅蛋白濃度百分比，以簡化操作、降低成本，并提高測定結(jié)果的準確性。

為達到上述目的，本發(fā)明提供了一種測定糖化血紅蛋白比例的方法，該方法是一種將磁珠分離與酶電極檢測相結(jié)合的直接測定糖化血紅蛋白比例的方法。

具體地說，本發(fā)明提供的測定糖化血紅蛋白比例的方法包括：

在磁珠表面固定血紅蛋白抗體，通過抗原-抗體反應(yīng)將待測樣品中的糖化血紅蛋白和血紅蛋白引入磁珠表面；

將上述引入了糖化血紅蛋白和血紅蛋白的磁珠與含二茂鐵結(jié)構(gòu)單元的硼酸或其衍生物接觸，糖化血紅蛋白N末端的果糖基含順式二醇結(jié)構(gòu)，與二茂鐵硼酸分子的硼酸基發(fā)生成環(huán)反應(yīng)，使磁珠上的糖化血紅蛋白與含二茂鐵結(jié)構(gòu)單元的硼酸或其衍生物反應(yīng)形成“磁珠-糖化血紅蛋白-二茂鐵硼酸”復合物；

分離磁珠，解離“磁珠-糖化血紅蛋白-二茂鐵硼酸”中的二茂鐵硼酸；

用含葡萄糖氧化酶的電極測定解離出的二茂鐵硼酸，根據(jù)其響應(yīng)電流測算出待測樣品中糖化血紅蛋白比例。