[發明專利]一種直接測定糖化血紅蛋白比例的方法

有效

• 申請號: 201210465460.2
• 申請日: 2012-11-16
• 公開（公告）號: CN103823071A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 李元光;李獻紅;付鐵英;楊軼穎;何偉
• 申請（專利權）人: 北京怡成生物電子技術有限公司
• 主分類號: G01N33/72
• 分類號: G01N33/72;G01N27/26
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 丁香蘭;韓蕾

1.一種測定糖化血紅蛋白比例的方法，該方法包括：

在磁珠表面固定血紅蛋白抗體，通過抗原-抗體反應將待測樣品中的糖化血紅蛋白和血紅蛋白引入磁珠表面；

將上述引入了糖化血紅蛋白和血紅蛋白的磁珠與含二茂鐵結構單元的硼酸或其衍生物接觸，使磁珠上的糖化血紅蛋白與含二茂鐵結構單元的硼酸或其衍生物反應形成“磁珠-糖化血紅蛋白-二茂鐵硼酸”復合物；

分離磁珠，解離“磁珠-糖化血紅蛋白-二茂鐵硼酸”中的二茂鐵硼酸；

用含葡萄糖氧化酶的電極測定解離出的二茂鐵硼酸，根據其響應電流測算出待測樣品中糖化血紅蛋白比例。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述磁珠為表面含羧基、羥基(-OH)和/或氨基的磁性微粒。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，所述血紅蛋白抗體為既能與血紅蛋白免疫親合反應、又能與糖化血紅蛋白免疫親合反應的抗體，所述在磁珠表面固定血紅蛋白抗體的方法包括：

對于表面含羧基的磁性微粒，通過EDAC和NHS對磁珠表面的羧基進行活化，活化后的羧基與血紅蛋白抗體的氨基反應，從而聯接固定上抗體；

對于表面含羥基的磁性微粒，通過氯化氰法對磁珠表面的羥基活化，活化后的羥基與血紅蛋白抗體的氨基反應，從而聯接固定上血紅蛋白抗體；

對于表面含氨基的磁性微粒，通過戊二醛交聯法聯接在磁珠表面固定上血紅蛋白抗體。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述待測樣品為全血樣品，該樣品經紅細胞裂解后釋放出糖化血紅蛋白和血紅蛋白；將釋放出血紅蛋白和糖化血紅蛋白的樣品與表面聯接上血紅蛋白抗體的磁珠反應，血紅蛋白和糖化血紅蛋白按它們自身在血液中的比例通過抗原-抗體免疫親合作用而引入到磁珠表面。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述含二茂鐵結構單元的硼酸或其衍生物為含二茂鐵結構單元的硼酸衍生物為硼酸基直接接在二茂鐵上的化合物如二茂鐵硼酸；或者為硼酸基通過其他基團間接接在二茂鐵上的化合物，如二茂鐵甲酰氨基苯硼酸、二茂鐵乙酰氨基苯硼酸、甲基二茂鐵甲酰氨基苯硼酸。

6.根據權利要求1所述的方法，其中，所述解離“磁珠-糖化血紅蛋白-二茂鐵硼酸”中的二茂鐵硼酸的步驟包括：

在磁珠分離后的“磁珠-糖化血紅蛋白-二茂鐵硼酸”復合物中加入其他包含順式二醇結構的多羥基化合物，從而解離出與糖化血紅蛋白結合的二茂鐵硼酸。

7.根據權利要求1或6所述的方法，該方法還包括：

向解離出的二茂鐵硼酸溶液中加入一定濃度的葡萄糖，形成葡萄糖測定液；或者在含順式二醇結構的多羥基化合物中先加入葡萄糖，再解離“磁珠-糖化血紅蛋白-二茂鐵硼酸”復合物，解離后的溶液直接為葡萄糖測定液；

然后用含葡萄糖氧化酶的電極測定葡萄糖測定液中的二茂鐵硼酸，根據其響應電流測算出待測樣品中糖化血紅蛋白比例。

8.根據權利要求1所述的方法，其中，含葡萄糖氧化酶的電極是將葡萄糖氧化酶滴加在電極表面、吸附在電極表面、共價結合在電極表面或其他方式放置于電極表面而得到的，其中所述電極選自絲網印刷電極、磁控濺射電極、玻碳電極、石墨電極或金屬電極。

9.根據權利要求1所述的方法，其中，用含葡萄糖氧化酶的電極測定解離出的二茂鐵硼酸溶液時，是將放置有葡萄糖氧化酶的電極插入葡萄糖溶液中測定；或是將葡萄糖溶液滴加在電極表面測定；或是在葡萄糖氧化酶電極表面構建虹吸通道，通過虹吸進樣方式測定。