[發明專利]一種檢測鎘生物可利用度的微生物細胞傳感器無效
| 申請號： | 201210465178.4 | 申請日： | 2012-11-19 |
| 公開（公告）號： | CN102911906A | 公開（公告）日： | 2013-02-06 |
| 發明（設計）人： | 莊國強;侯啟會;馬安周;崔萌萌;王艷娟 | 申請（專利權）人： | 中國科學院生態環境研究中心 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12Q1/02;G01N21/64;C12R1/19 |
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| 地址： | 100085*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 生物 利用 微生物 細胞 傳感器 | ||
1.一種微生物細胞傳感器，由細菌作基本材料，通過基因工程手段構建，用來檢測水體和土壤中鎘的生物可利用度。
2.根據權利要求1所述的微生物細胞傳感器，其特征在于：大腸桿菌為宿主細胞。
3.根據權利要求1所述的微生物細胞傳感器，其特征在于：高靈敏度的螢火蟲熒光素酶luc為報告基因。
4.根據權利要求1所述的微生物細胞傳感器，其使用方法：
第一步：接種傳感器細胞單菌落于50mL三角瓶中，添加氨芐青霉素到終濃度為100μg/mL，37℃，200r·min-1過夜培養；
第二步：取0.5mL的上述菌液到14.5mL的新鮮LB培養基中，37℃，200r·min-1培養至OD600＝1.2；
第三步：將菌液用新鮮LB培養基稀釋至OD600＝0.4；
第四步：取50μL稀釋后的菌液分別與鎘標準溶液、待測樣品等體積混合，30℃靜置誘導；
第五步：將40μL空載體細胞與50μL誘導培養液混合，加入10μL?1M?K2HPO4(pH?7.8)和20mM?EDTA的裂解緩沖液，-70℃條件下快速冷凍混合物10min，然后23℃水浴細胞3min，最后加入300μL新鮮配制的裂解混合物(見附錄)，混勻后室溫孵育10min；
第六步：每個96孔板中加入20μL的裂解液，再加入100μL熒光素酶檢測液后，用熒光檢測儀立刻檢測；
第七步：根據標準樣品誘導下傳感器細胞的熒光值，制作熒光強度隨誘導物鎘濃度變化的標準曲線，利用標準曲線計算待測樣品的中鎘的相對濃度。
5.根據權利要求4所述的微生物細胞傳感器的使用方法，其特征在于：微生物細胞傳感器的培養溫度為37℃，微生物細胞傳感器的誘導溫度為30℃，熒光強度值運用熒光檢測儀進行采集和檢測。
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