[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用石英晶體微天平檢測(cè)可卡因的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210464636.2
• 申請(qǐng)日: 2012-11-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102967523A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬宏偉;朱志強(qiáng);汪杰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院蘇州納米技術(shù)與納米仿生研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N5/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N5/02
• 代理公司: 西安創(chuàng)知專(zhuān)利事務(wù)所 61213
• 代理人: 譚文琰

1.一種利用石英晶體微天平檢測(cè)可卡因的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

步驟一、配制DNA濃度為0.2μM的DNA組裝液，然后采用DNA組裝液孵育清洗干凈的QCM芯片，得到表面自組裝DNA的QCM芯片；所述DNA為巰基修飾DNA，DNA序列為：5’-TCA?CAG?ATG?AGT?AAA?AAAAAA?AAA-3’；

步驟二、采用濃度為2μM的巰基聚乙二醇的乙醇溶液孵育步驟一中所述表面自組裝DNA的QCM芯片使芯片表面的多余位點(diǎn)封閉；

步驟三、制備引發(fā)劑標(biāo)記的DNA溶液；

步驟四、采用適配體DNA溶液和步驟三中所述引發(fā)劑標(biāo)記的DNA溶液共同孵育步驟二中封閉后的QCM芯片，用緩沖溶液沖洗孵育后的芯片表面，得到固定有適配體DNA的QCM芯片；將所述固定有適配體DNA的QCM芯片裝入石英晶體微天平的反應(yīng)器中，然后向反應(yīng)器中通入緩沖液，待基線(xiàn)平穩(wěn)后，讀取石英晶體微天平監(jiān)測(cè)到的頻率F1；所述適配體DNA的序列為ACT?CAT?CTG?TGA?ATC?TCG?GGA?GAC?AAG?GAT?AAATCC?TTC?AAT?GAA?GTG?GGT?CTC?CC；所述緩沖液為0.1M?pH值為7.0的PBS緩沖液；

步驟五、將步驟四中裝入石英晶體微天平的反應(yīng)器中的QCM芯片取出，氮?dú)獯蹈珊笾糜诒砻嬉l(fā)聚合反應(yīng)液中，并將整個(gè)反應(yīng)體系移至手套箱中，室溫下反應(yīng)2h～4h后將QCM芯片從表面引發(fā)聚合反應(yīng)液中取出，用PBS溶液沖洗QCM芯片，然后用氮?dú)獯蹈桑?!-- SIPO -->

步驟六、將步驟五中吹干后的QCM芯片裝入石英晶體微天平的反應(yīng)器中，然后向反應(yīng)器中通入緩沖液，待基線(xiàn)平穩(wěn)后，讀取石英晶體微天平監(jiān)測(cè)到的頻率F2，再向反應(yīng)器中通入檢測(cè)物，待石英晶體微天平頻率變化曲線(xiàn)平穩(wěn)后讀取監(jiān)測(cè)到的頻率F3，計(jì)算頻率F2和步驟四中所述頻率F1的差值ΔF′，頻率F2和頻率F3的差值ΔF″，當(dāng)ΔF″/ΔF′≥30%時(shí)判定檢測(cè)物中含有可卡因；所述緩沖液為0.1M?pH值為7.0的PBS緩沖液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用石英晶體微天平檢測(cè)可卡因的方法，其特征在于，步驟一中所述DNA組裝液由DNA、NaCl和濃度為0.1M的pH值為7.2的PBS緩沖液混合均勻制成，DNA組裝液中NaCl的濃度為0.2M。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用石英晶體微天平檢測(cè)可卡因的方法，其特征在于，步驟三中所述引發(fā)劑標(biāo)記的DNA溶液的制備方法為：將10μL濃度為10mg/mL新鮮配置的NHS-酰溴溶液與5μL濃度為1M的pH值為9的NaHCO₃/Na₂CO₃溶液混合均勻，并加水稀釋至40μL，隨后加入3μL濃度為100μM的氨基修飾DNA，加水稀釋至50μL，25℃下反應(yīng)1h，隨后將反應(yīng)產(chǎn)物用含0.2M?NaCl的濃度為0.1M的PBS緩沖溶液稀釋至600μL得到引發(fā)劑標(biāo)記的DNA溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利用石英晶體微天平檢測(cè)可卡因的方法，其特征在于，所述氨基修飾DNA為5’氨基功能化DNA，DNA序列為5’-GTC?TCC?CGA?GAT-3’。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用石英晶體微天平檢測(cè)可卡因的方法，其特征在于，步驟四中所述適配體DNA溶液為含100μM適配體DNA的0.1M的PBS溶液，適配體DNA溶液與引發(fā)劑標(biāo)記的DNA溶液的體積比為1∶25。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用石英晶體微天平檢測(cè)可卡因的方法，其特征在于，步驟四中所述孵育的溫度為25℃，孵育的時(shí)間為0.5h～2h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用石英晶體微天平檢測(cè)可卡因的方法，其特征在于，步驟五中所述表面引發(fā)聚合反應(yīng)液的制備方法為：配制去離子水與甲醇體積比為1∶1的混合溶液，向每升混合溶液中加入16mmol?2,2'-聯(lián)吡啶、5mmol寡聚甲基丙烯酸寡乙二醇酯和5mmol甲基丙烯酸-2-羥基乙酯，混合均勻后加入0.004mmol的氯化銅和0.1mol氯化鈉，得到淡藍(lán)色溶液，對(duì)淡藍(lán)色溶液除氧10min～30min，隨后向每升除氧后的淡藍(lán)色溶液中加入0.004mmol抗壞血酸，保持氮?dú)夥諊玫郊t色的表面引發(fā)聚合反應(yīng)液。