[發(fā)明專利]一種金耳發(fā)酵美白液的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210464470.4
• 申請(qǐng)日: 2012-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN102908303A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧超;王敏;陳敬華;滕麗萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K8/99
• 分類號(hào): A61K8/99;C12N1/14;A61Q19/02;A61K8/67;A61K8/73
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種金耳發(fā)酵美白液的制備方法。屬生物工程技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域。

背景技術(shù)

金耳為擔(dān)子菌綱，銀耳目，銀耳科，銀耳屬的干燥子實(shí)體，主要分布于我國(guó)西藏云南等地，野生資源稀有，古籍文獻(xiàn)記載用于肺熱、痰多、咳嗽、氣喘等癥的治療，具有較高的藥用價(jià)值。研究表明，金耳深層發(fā)酵液中含有人體必需的氨基酸，并且有鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、鋅等礦質(zhì)元素。通過(guò)深層發(fā)酵獲得發(fā)酵液再加上其他組分獲得具有美白作用的發(fā)酵液是一種天然的，沒(méi)有副作用的美白護(hù)膚品的成分，現(xiàn)在市面上還沒(méi)有產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種金耳發(fā)酵美白液的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：將金耳斜面保藏菌種活化，接種至搖瓶種子液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的種子液接入搖瓶發(fā)酵液體培養(yǎng)基培養(yǎng)。發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵液濃縮，脫蛋白，透析后得到澄清的淡黃色液體。在加上其他組分，獲得具有美白作用的液體。

具體來(lái)說(shuō)，首先，我們將實(shí)驗(yàn)室金耳斜面保藏菌種活化，活化的菌絲體接入三角瓶發(fā)酵后離心，上清液經(jīng)過(guò)濃縮，脫蛋白，透析后得到所需發(fā)酵液。以重量百分比計(jì)發(fā)酵液60％-80％；再加入VC曲酸脂5％-8％；透明質(zhì)酸0.1％-0.5％；蒸餾水11.5％-34.9％。

上述過(guò)程中，斜面培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，搖瓶種子培養(yǎng)基為PDA1L加磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0，發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖4g/100mL、酵母粉1g/100mL、磷酸二氫鉀0.2g/100mL、硫酸鎂0.05g/100mL，培養(yǎng)條件為起始pH6.0，250mL三角瓶裝培養(yǎng)基100mL于25℃，120r/min，振蕩培養(yǎng)7d，離心后上清液用Sevage法去除游離蛋白質(zhì)，蒸餾水透析去除無(wú)機(jī)鹽，得到金耳發(fā)酵液。濃縮后取60-80g，加入VC磷酸酯5g-8g；透明質(zhì)酸0.1g-0.5g；蒸餾水補(bǔ)足100mL。濾過(guò)除菌。

所述用Sevage法去除游離蛋白，是按發(fā)酵液1/5的體積加入氯仿，然后加入氯仿體積1/5的正丁醇，混合后振蕩過(guò)夜后4000rpm離心20min，收集上清液，反復(fù)操作5次至氯仿-正丁醇層不渾濁為止。

所述的透析是指將去除游離蛋白質(zhì)的發(fā)酵液裝入透析袋中，扎緊袋口，懸浮于蒸餾水中，透析72h，中間每隔12小時(shí)換水一次。

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)例將具體說(shuō)明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對(duì)本發(fā)明的限定。

實(shí)例一

1.發(fā)酵液制備

出發(fā)菌種為實(shí)驗(yàn)室斜面保藏菌種；

(1)搖瓶種子培養(yǎng)

搖瓶種子培養(yǎng)基：PDA1L加磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0；

培養(yǎng)方法：從活化的斜面菌種中取3～4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養(yǎng)基中，250mL三角瓶裝培養(yǎng)基100mL于25℃，120r/min，振蕩培養(yǎng)7d；

(2)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)

發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖4g/100mL、酵母粉1g/100mL、磷酸二氫鉀0.2g/100mL、硫酸鎂0.05g/100mL；

培養(yǎng)方法：將培養(yǎng)好的種子以15％的接種量接入搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基中25℃，120r/min，振蕩培養(yǎng)7d；

(3)發(fā)酵液濃縮，脫蛋白，透析

培養(yǎng)后離心，取上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后用Sevage法去除游離蛋白，即按發(fā)酵液1/5的體積加入氯仿，然后加入氯仿體積1/5的正丁醇，混合后振蕩過(guò)夜后4000rpm離心20min，收集上清液，反復(fù)操作5次至氯仿-正丁醇層不渾濁為止。然后取上清液中裝入透析袋中，扎緊袋口，懸浮于蒸餾水中，透析72h，中間每隔12小時(shí)換水一次，得發(fā)酵液。

2.其他組分的添加及濾過(guò)除菌

(1)其他組分的添加

發(fā)酵液濃縮后取60-80g，加入VC磷酸酯5g；透明質(zhì)酸0.1g；蒸餾水補(bǔ)足100mL。

(2)濾過(guò)除菌

上述液體通過(guò)0.22μm的濾膜除菌。

實(shí)例二

對(duì)金耳發(fā)酵液樣品進(jìn)行了氨基酸組成測(cè)定，測(cè)定結(jié)果表明，所含氨基酸中甘氨酸占38％以上，纈氨酸占9％以上，苯丙氨酸占7％以上，酪氨酸占7％以上，亮氨酸占6％以上，用苯酚-硫酸法測(cè)得多糖含量為75.6％。金耳發(fā)酵液的氨基酸組成及含量見(jiàn)表1。

表1金耳發(fā)酵液的氨基酸組成及含量