[發明專利]一種用4-硝基-1-萘酚或其衍生物為顯色團制備β-半乳糖苷酶顯色底物的方法及其應用

有效

• 申請號: 201210461131.0
• 申請日: 2012-11-15
• 公開（公告）號: CN102977160A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 廖飛;楊曉蘭;黨紀政;劉紅博;張奕;李元麗
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: C07H15/203
• 分類號: C07H15/203;C07H1/00;G01N21/31;G01N33/52
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1.一種用4-硝基-1-萘酚或其衍生物為顯色團制備β-半乳糖苷酶顯色底物的方法及其應用；具體涉及將β-D-吡喃半乳糖羥基全部酰化成酯并進一步轉變成α-溴代半乳糖酯，再用4-硝基-1-萘酚或其衍生物類顯色團取代溴得到β-D-吡喃半乳糖苷酯，將這類糖苷酯脫去酰基得β-D-吡喃半乳糖苷作為β-半乳糖苷酶的顯色底物；這類顯色底物在β-半乳糖苷酶作用釋放4-硝基-1-萘酚或其衍生物為顯色產物，用于通過測定顯色產物吸收確定β-半乳糖苷酶活性。

2.據權利要求1，一種用4-硝基-1-萘酚或其衍生物為顯色團制備β-半乳糖苷酶顯色底物的方法及其應用，所述β-D-吡喃半乳糖苷類顯色底物結構如下：

R＝-GOOH，-COGH₃，-NO₂，-Cl

當R不為H時則為但不限于為-COOH，-COCH₃，-NO₂，-Cl或-Br；這些取代基位于萘環的5，6，8中任一或多個位置，即有多個取代基的4-硝基-1-萘酚衍生物也適合作為顯色團用于制備此類顯色底物；這些適合的顯色團包括但不限于4，5-二硝基-1-萘酚、4，8-二硝基-1-萘酚、6-羧基4-硝基-1-萘酚、6-溴4-硝基-1-萘酚、6-乙酰基4-硝基-1-萘酚、6-氯-4-硝基-1-萘酚。

3.據權利要求1，一種用4-硝基-1-萘酚或其衍生物為顯色團制備β-半乳糖苷酶顯色底物的方法及其應用，β-半乳糖苷酶的這類顯色底物合成過程涉及如下步驟：

(一)β-D-吡喃半乳糖在堿或酸催化下，用包括但不限于甲酸或乙酸短鏈羧酸對應的酰化劑在有或無溶劑條件下反應得β-D-吡喃半乳糖五羧酸酯為中間體1；所用堿催化劑包括但不限于碳酸和醋酸的無水鈉鹽和鉀鹽、吡啶和三乙胺；所用酸催化劑包括但不限于磷酸、硫酸、對甲苯磺酸；所用酰化劑包括但不限于甲酸酐、甲酰氯、乙酸酐及乙酰氯；所用溶劑包括但不限于丙酮或四氫呋喃或二者混合物；

(二)以甲酸或乙酸為溶劑吸收氣體HBr制成對應溶液，再加入中間體1反應生成α-溴代-D-吡喃半乳糖苷四羧酸酯為中間體2；

(三)在無機堿和丙酮或二甲基甲酰胺或水及其混合物中，上述中間體2與4-硝基-1-萘酚或其衍生物以混懸液狀態反應生成4-硝基-1-萘-β-D-吡喃半乳糖苷四羧酸酯為中間體3或4-硝基-1-萘酚衍生物的β-D-吡喃半乳糖苷四羧酸酯為中間體3；所用無機堿包括但不限于氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鉀和碳酸鈉碳；相轉移催化劑也適用于此步反應制備所述中間體3，這類相轉移催化劑包括但不限于四丁基溴化銨、四芐基溴化銨；

(四)中間體3在堿催化下，在甲醇或乙醇或水中脫酰基得4-硝基-1-萘基-β-D-吡喃半乳糖苷或4-硝基-1-萘酚衍生物的β-D-吡喃半乳糖苷，即為β-半乳糖苷酶的新型顯色底物；所用堿催化劑包括但不限于甲醇鈉、甲醇鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀。

4.據權利要求1，一種用4-硝基-1-萘酚或其衍生物為顯色團制備β-半乳糖苷酶顯色底物的方法及其應用，這類顯色底物制備方法還包括用權利要求3步驟(一)制備的中間體1，在三氟化硼-乙醚及三丁基氧化錫或三甲基硅基三氟甲磺酸銀催化下，用苯為溶劑與4-硝基-1-萘酚或其衍生物反應得所述β-D-吡喃半乳糖苷類顯色底物。