[發明專利]一種抗小麥黃花葉病毒轉基因小麥代謝物檢測方法

有效

• 申請號: 201210460498.0
• 申請日: 2012-11-15
• 公開（公告）號: CN103808818A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 付偉;王玲;賀艷;朱振營
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種抗小麥黃花葉病毒代謝物檢測方法，包括以下步驟：

1）將抗小麥黃花葉病毒轉基因小麥的種子脫殼，磨成粉狀，加入提取溶液于4℃浸提；

2）離心后干燥，加入內標物；

3）干燥，加入衍生試劑；

4）采用氣相色譜-質譜聯用的方法對衍生后的樣品進行分析；

其特征在于，步驟1）中所述提取溶液為體積比為2：3：3的水、乙腈和異丙醇的混合液。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，

步驟4）中色譜條件為：柱箱程序：60℃保持1min，然后每分鐘10℃升溫至325℃，保持10min，1min后運行；前進樣器：10μl；進樣量：1μl；載氣：He，99.999%；壓力：10.473psi；色譜柱：DB-5ms:1611.66442；DB-5ms325℃：30m×0.25mm×0.25μm；

步驟4）中質譜條件為：EI能量：70eV；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；溶劑延遲：7min。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟1）中為向100mg粉末中加入1mL提取溶液于4℃浸提。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟1）中浸提時間為20min。

5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟2）中所述離心是指在4℃，12200g/min，離心2min。

6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟2）中使用的內標物為十四酸。

7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟3）中所述衍生試劑的制備方法為：將10μl鹽酸甲氧胺溶于40mg/ml吡啶中，30℃，1500g，振蕩90min，然后加入N-甲基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺和1%三甲基氯硅烷90μl，37℃，振蕩30min，即得。

8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，步驟3）中衍生時間為30min或90min。

9.一種用于抗小麥黃花葉病毒轉基因小麥代謝物GC-MS檢測的提取試劑，其特征在于，所述提取試劑為體積比為2：3：3的水、乙腈和異丙醇的混合液。