[發明專利]β-糖苷酶突變體及其編碼基因與其在生產人參皂苷CK中的應用

有效

• 申請號: 201210460365.3
• 申請日: 2012-11-15
• 公開（公告）號: CN103805581A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 梁朝寧;唐雙焱
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/56;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/21;C12P33/20;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種蛋白，是如下（a）或（b）：

（a）由序列表中序列4所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

（b）將序列表中序列4所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有β-糖苷酶活性由序列4衍生的蛋白質。

2.編碼權利要求1所述蛋白的基因。

3.如權利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因是如下(1）或(2）或(3）的DNA分子：

(1）序列表中序列3所示的DNA分子；

(2）在嚴格條件下與（1）限定的DNA序列雜交且編碼具有β-糖苷酶活性蛋白的DNA分子；

(3）與（1）限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且編碼具有β-糖苷酶活性蛋白的DNA分子。

4.含有權利要求2或3所述基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。

5.如權利要求4所述的重組載體，其特征在于：

所述重組載體為將權利要求1所述蛋白的編碼基因插入表達載體中，得到表達權利要求1所述蛋白的重組載體。

6.權利要求1所述蛋白在作為β-糖苷酶中的應用。

7.權利要求1所述蛋白、權利要求2或3所述基因或權利要求4所述重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌在生產人參皂苷CK中的應用。

8.一種生產人參皂苷CK的方法，包括如下步驟：

1）發酵權利要求4所述重組菌，收集發酵液、離心收集菌體、破碎菌體后離心收集上清液；

2）將所述上清液與人參皂苷底物Rb₁在MC緩沖液中反應，得到人參皂苷CK。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：

1）所述發酵在IPTG誘導下進行；

2）所述MC緩沖液為pH值為5.5的MC緩沖液；所述pH值為5.5的MC緩沖液具體由終濃度為200mM磷酸氫二鈉、終濃度為100mM檸檬酸和水組成。