[發明專利]用于預防或治療肺癌的制劑及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201210459106.9
• 申請日: 2012-11-14
• 公開（公告）號: CN102935239A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 王關嵩;陳華萍;張建祥;賀斌峰;魏征華;王長征;劉雪萍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/48;A61P35/00
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

技術領域

本發明涉及一種用由新型納米材料包裹的反義寡核苷酸制成的制劑，尤其涉及一種用于預防或治療肺癌的制劑及其制備方法與應用。

背景技術

反義技術作為一種基因治療的策略，具有序列特異性的特點，具有特異調控已知基因表達的優越性。但是反義寡核苷酸進入細胞的機制尚不清楚，目前認為可能的機制有：1）通過受體介導的內吞攝入；2）通過細胞膜的被動擴散。由于硫代修飾后，寡核苷酸帶有負電荷，難以通過帶有負電荷的細胞膜表面，如果不采取任何介導方法，細胞對寡核苷酸的攝取是極為有限的。早期，人們為了高效地將寡核苷酸導入細胞內，采取了多種策略，如顯微注射術、電穿孔術、鈣離子介導、鏈球菌溶血素介導等，這些都可以顯著提高寡核苷酸的轉染效率，但它們對細胞均有顯著的毒副作用和損傷，導致其在體內實驗應用中存在困難。所以，尋找一種高效、低毒的運輸載體成為亟待解決的問題。

國內外先后報道了一些可運輸藥物的載體，如：合成多聚體（如石因堿）、類脂、脂質體、殼聚糖、RNAs和病毒衣殼。它們的效應在既往的文獻中已被清楚地描述。而Ac-αCD是一種藥物傳輸載體的pH響應性環糊精衍生物，如下述說明書中式Ⅰ所示。與先前的藥物運輸載體相比較，Ac-αCD具有以下優點：1）Ac-αCD具有良好的生物相容性，且可生物降解，降解產物對機體無毒副作用。2）合成過程簡單，材料的降解性可以簡單地通過環糊精種類及縮醛化時間在一定范圍內調控；3）Ac-αCD具有良好的pH敏感性，即在正常pH7.4時水解緩慢，而在pH5.0時較快水解；4）Ac-αCD易溶于二氯甲烷，氯仿，甲醇，乙醇，丙酮等常見溶劑，有利于各種傳輸系統帶的制備；5）通過簡單的乳液/溶劑揮發可以便利的制備粒徑大小及分布可調控的納米微粒。

目前而言，納米載體攜帶的目標主要是具有治療或研究用途的藥物或基因。研究顯示納米載體在介導基因轉染方面具有較好的優勢，首先納米材料一般具有生物兼容性，自身不會導致細胞的異常轉化與死亡。其次納米粒子具有特殊的結構和表面電荷，有利于細胞的攝取，保證其攜帶的基因具有較高的轉染率。基于納米載體的多種優勢，其在基因轉染方面的應用也得到不斷推廣和發展。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用作為載體的新型納米材料包裹的反義寡核苷酸制成的用于預防或治療肺癌的制劑。

本發明所述的用于預防或治療肺癌的制劑，其包含式I的pH響應性環糊精衍生物和SEQ?ID?NO:1所示的反義寡核苷酸

式I。

本發明所述的上述制劑的制備方法，主要步驟包含：

1）合成式I的pH響應性環糊精衍生物：氮氣保護下，2-甲氧基丙烯中添加含環糊精的無水二甲基亞砜，再加入吡啶對甲苯磺酸丙酮化作用后，在反應混合液中加入三乙胺，過濾，低壓干凍，干燥后得到所述pH響應性環糊精衍生物；

2）將SEQ?ID?NO:1所示的反義寡核苷酸包被入步驟1）制備的pH響應性環糊精衍生物，包被時添加聚乙烯亞胺（PEI1800），制得所述制劑。

本發明的優選實施例中，步驟1）具體為：氮氣保護下，4mL?2-甲氧基丙烯中添加20mL含1g環糊精的無水二甲基亞砜，再加入16mg吡啶對甲苯磺酸丙酮化作用3小時后，在反應混合液中加入0.5mL三乙胺，過濾之后，低壓干凍白色粉末，收集縮醛化后的沉淀，真空干燥即得到所述環糊精衍生物。

本發明的優選實施例中，步驟2）所述聚乙烯亞胺與環糊精衍生物的質量比為1.25~5.0：100。

更優選地，所述聚乙烯亞胺與環糊精衍生物的質量比為1.25：100，2.5：100或5.0：100。

本發明所述的制劑可用于制備預防或治療肺癌的藥物。

用于預防或治療肺癌的制劑，為Ac-αCD、PEI1800與SEQ?ID?NO:1所示的反義寡核苷酸重組合成的納米材料，其為白色粉末狀；分子量為2900Da。

本發明中，將環糊精衍生物、PEI1800與反義寡核苷酸的重組合成，即將反義寡核苷酸包裹于納米材料內，這保證了反義核苷酸的結構不被破壞，保持原有的生物學活性。而脂溶性的納米材料易于進入細胞內，可有效的攜帶反義寡核苷酸進入細胞。細胞內的酸性環境（內涵體和溶酶體具有較低的pH微環境pH5.0）可增加環糊精衍生物的水溶性，便于重組體的有效釋放。