[發明專利]檢測沙丁胺醇的化學發光免疫檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210458924.7
• 申請日: 2008-11-27
• 公開（公告）號: CN102928601A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 陳峰;梁曉翠;盧慶鋆;徐曉嬰;盧永紅
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

本申請是中國發明專利申請“檢測沙丁胺醇的化學發光免疫檢測試劑盒”的分案申請，申請號為200810203436.5，申請日為2008年11月27日。

技術領域

本發明涉及一種檢測沙丁胺醇的化學發光免疫檢測試劑盒，用于檢測動物源性食品中如動物組織、內臟、血液、尿液和飼料、飼料原料中的沙丁胺醇含量或殘留量。屬于免疫學檢測領域。

背景技術

沙丁胺醇(Salbutamol，SAL)屬于β興奮劑。β興奮劑是營養重分配劑的一種，是一類結構和功能類似腎上腺素和去甲腎上腺素的苯乙醇胺類衍生物，它能改善脂肪型動物的肉與脂肪的比例，降低酮體脂肪含量，提高瘦肉率，并能加速動物生長，而被添加于動物飼料中。常見的β2-興奮劑有克倫特羅、萊克多巴胺及沙丁胺醇等。隨著我國對克倫特羅(俗稱“瘦肉精”監管力度的加大，克倫特羅的使用逐漸減少，其他β2-興奮劑的使用逐漸增加。由于沙丁胺醇有類似于克倫特羅的作用，在動物組織中殘留，從而對人體產生不利影響，所以我國禁止沙丁胺醇其作為飼料添加劑使用。

在沙丁胺醇的檢測方法方面，目前最為常用的方法包括高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜聯用(CGC-MS)、液相色譜-質譜聯用(LC-MS)、毛細管電泳、酶聯免疫吸附分析法(enzyme?linked?immunosorbent?assay，ELISA)等方法。

1、高效液相色譜(HPLC)用于沙丁胺醇的檢測：

HPLC法具有檢測精確度高、假陽性率低的特點。HPLC法的主要缺點是儀器價格昂貴、操作比較繁瑣，耗時長，檢測費用昂貴；且前期樣品的萃取條件的選擇也對檢測靈敏度和準確性有較大影響。

2、氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)用于沙丁胺醇的檢測：

GC-MS靈敏度很高，假陽性率低。該方法的主要缺點是樣品需要衍生化這樣復雜的前期處理。雖然經過衍生化處理的樣品能在質譜中給出更多的結構信息，但是衍生化會產生多個不同的產物并導致樣品的部分丟失，造成實驗結果的偏差。

3、液相色譜-質譜聯用(LC-MS)用于沙丁胺醇的檢測：

LC-MS對樣品不需要衍生化處理，可對尿液、血液、肝臟、毛發和眼球樣品進行檢測。LC如果與兩個串聯MS聯用，可進一步提高信噪比。LC-MS的缺點與GC-MS一樣，操作步驟繁瑣，需要貴重儀器，所以一般用作對陽性結果的確認手段。

4、毛細管電泳用于沙丁胺醇的檢測：

毛細管區帶電泳法分離效率可達幾百萬理論塔板數，操作快速簡便，所需樣品量少。但是該方法所需儀器昂貴，且可檢測出沙丁胺醇的最低殘留量達不到其它方法的靈敏度。

5、酶聯免疫吸附分析法(ELISA)用于沙丁胺醇的檢測：

酶聯免疫吸附分析法是當前應用最廣、發展最快的免疫酶技術之一，主要優點在于檢測迅速，樣品前處理簡單，檢測系統操作簡單，成本低，同時便于進行大規模檢測。其基本原理是，將抗原(或抗體)吸附在固相載體上，酶標記抗體(或抗原)與相應的抗原(或抗體)反應，結合在免疫復合物上的酶在遇到相應底物時，可以催化底物水解、氧化或還原并產生有色物質，顏色的深淺與相應的抗體(或抗原)量成正比，故可以借助成色反應的程度來定性或定量抗體(或抗原)。ELISA檢測方法主要包括雙抗體夾心法、間接法、競爭法等。雙抗體夾心法主要適用于分子量較大的完全抗原，而競爭法則適用于抗原決定位點較少的小分子量半抗原。由于沙丁胺醇是小分子化合物(相對分子質量小于5000)，屬于半抗原，因此常用競爭酶聯免疫吸附法來測定。

6、化學發光免疫檢測技術的工作原理與特點

化學發光免疫檢測技術不同于酶聯免疫吸附分析法，它是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光檢測技術的高靈敏性和免疫分析技術的高特異性。

化學發光免疫分析法的基本原理與ELISA相似，不同之處在于酶標記物的反應體系是化學發光反應。HRP(辣根過氧化物酶)和魯米諾或其衍生物體系就是常用的反應體系之一，在該發光體系中加入增強劑可增加化學發光強度，并在較長時間保持穩定，從而大大提高免疫分析的靈敏度。如我國胥傳來等(胥傳來等，分析化學研究簡報，2005，33(5)：699-702)建立的間接競爭化學發光免疫法檢測豬尿樣中克倫特羅，實際檢測范圍為0.04～25.8μg/kg。胥傳來等人所用方法的缺點是需要同時使用一抗和二抗(其中二抗為酶標記抗體)，兩種抗體加入后都需要進行溫育反應，延長了檢測時間。

發明內容