[發明專利]檢測沙丁胺醇的化學發光免疫檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210458924.7
• 申請日: 2008-11-27
• 公開（公告）號: CN102928601A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 陳峰;梁曉翠;盧慶鋆;徐曉嬰;盧永紅
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

1.一種檢測沙丁胺醇的化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于由以下組分組成：

(1)96孔不透明白色酶標板，12條×8孔，包被有沙丁胺醇-人血清白蛋白交聯復合物，用鋁膜真空密封包裝；

(2)沙丁胺醇標準品溶液6瓶，濃度分別為：

0μg/L、0.04μg/L、0.12μg/L、0.36μg/L、1.08μg/L、3.24μg/L；

(3)沙丁胺醇-辣根過氧化物酶標記抗體溶液；

(4)發光底物A液為魯米諾及增強劑，發光底物B液為尿素過氧化氫；

(5)100倍濃縮緩沖液：使用前稀釋100倍成為工作濃度緩沖液，其稀釋后的工作濃度緩沖液為0.05mol/L?PBST緩沖液，pH7.4，含0.05％(v/v)Tween-20；

所述組分的制備：

沙丁胺醇半抗原的準備：將沙丁胺醇酸化，在4℃無光低溫環境中與亞硝酸鈉作用，生成含重氮基正離子的中間體，重氮化的沙丁胺醇作為半抗原，用于后面合成免疫抗原與包被抗原；

人血清白蛋白-沙丁胺醇包被抗原的合成：將沙丁胺醇與人血清白蛋白采用重氮化法進行偶聯得到免疫抗原；

沙丁胺醇-過氧化物酶標記抗體的制備：將上述免疫抗原注入Balb/C小鼠體內，經多次加強免疫后，使其產生抗體血清，取出免疫后小鼠的脾細胞，加入離心管中混勻，將上述脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合，在含有HAT溶液的96孔培養板中進行CO2培養，篩選陽性孔，然后利用有限稀釋法得到分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株，取健康Balb/C小鼠，腹腔注射滅菌液體石蠟1mL，7d后向腹腔注射上述雜交瘤細胞懸液1mL，7d后采集腹水，加等量液體石蠟稀釋，加入二氧化硅粉末混勻，離心得澄清腹水，澄清腹水用辛酸-硫酸銨法進行純化，再經透析得到純化的沙丁胺醇單克隆抗體，沙丁胺醇單克隆抗體與辣根過氧化物酶偶聯，從而得到沙丁胺醇-過氧化物酶標記抗體；

包被有沙丁胺醇-HSA交聯復合物的不透明白色酶標板制備：用緩沖液將沙丁胺醇-HSA交聯復合物稀釋后用于包被不透明白色酶標板的檢測孔，4℃過夜后用PBST緩沖液洗滌，然后加入200μL封閉液，所述封閉液含2％(w/v)HSA的PBST，37℃溫育2h，傾去孔內液體，干燥后完成。