[發(fā)明專利]微生物菌群結構的快速定性與定量方法及其在中國白酒生產(chǎn)中的應用

無效

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• 申請日: 2012-11-14
• 公開（公告）號: CN102911998A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設計）人: 徐巖;吳群
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/68
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

本發(fā)明涉及一種基于微生物在特殊鑒別培養(yǎng)基上的特殊菌落形態(tài)來對微生物菌群結構的快速定性與定量方法，以及利用該方法在各種釀造食品中分析微生物菌群結構及其演變規(guī)律的應用，屬于生物工程技術領域。

背景技術

白酒行業(yè)是我國優(yōu)勢民族傳統(tǒng)的制造業(yè)，是食品工業(yè)的重要組成部分。2011年白酒制造業(yè)產(chǎn)量達1025.55萬千升，工業(yè)產(chǎn)值3831.27億元，比2010年同比增長41.40％。因此白酒行業(yè)的發(fā)展對于我國食品行業(yè)甚至國民經(jīng)濟的發(fā)展都具有重要的意義。然而，我國白酒制造業(yè)由于釀造機理缺乏，在釀造工業(yè)技術水平上卻與國際蒸餾酒和釀造酒工業(yè)存在著明顯的差距。因此，只有科學地認識白酒釀造的生物學過程，才能對其進行現(xiàn)代化改造，提高我國白酒生產(chǎn)技術水平。

白酒釀造微生物是白酒釀造的關鍵因素。因此，認識白酒釀造微生物的發(fā)酵過程是認識白酒釀造機制的重要基礎。但是中國白酒屬于復雜的多微生物自然釀造過程，是多種微生物共同作用的結果，包括酵母、細菌和霉菌等。因此，認識釀造微生物菌群結構是解析白酒釀造機制的關鍵。

目前，對于微生物菌群結構的研究，已經(jīng)從以前的傳統(tǒng)分離技術轉向未培養(yǎng)技術分析，并取得了一定的進展。但是我國白酒釀造微生物的研究發(fā)展比較緩慢，上述兩種分離技術仍存在著自身的缺陷：對于傳統(tǒng)分離培養(yǎng)技術，只能對微生物總量進行分析，無法明確各類微生物的數(shù)量及其變化；對于未培養(yǎng)手段，也存在一定的問題，例如較難區(qū)分活菌和死菌，無法同時對微生物種屬進行定性與定量，而且該技術儀器要求高，且費時、費力、費資。由于上述固有的缺陷，對釀造微生物菌群結構的認識仍然較為片面，無法系統(tǒng)、全面的認識整個微生物菌群的發(fā)酵特征。

本發(fā)明公開了一種針對中國白酒群體微生物發(fā)酵特征的微生物菌群快速同時定性與定量方法，該技術基于微生物菌落形態(tài)特征與種屬的對應關系，能夠經(jīng)濟、快速的對白酒釀造過程中各種細菌、酵母及霉菌的發(fā)酵特征進行同時定性與定量分析。基于該技術，可對白酒釀造過程微生物菌群結構及其演變規(guī)律進行系統(tǒng)的解析，為進一步對醬香型白酒功能微生物的開發(fā)與應用，以及提升白酒的品質(zhì)奠定了基礎。

發(fā)明內(nèi)容

要解決的技術問題

本發(fā)明要解決的一個技術問題建立了復雜的微生物群體發(fā)酵系統(tǒng)中微生物群體演變規(guī)律解析的快速定性與定量分析技術。本發(fā)明要解決的一個技術問題是提供了白酒釀造過程中復雜微生物菌群結構及其演變規(guī)律分析的方法。

本發(fā)明的技術方案

微生物菌群結構的快速定性與定量方法及其在中國白酒生產(chǎn)中的應用，其對混合微生物發(fā)酵系統(tǒng)中酵母、細菌、霉菌的菌群結構及其演變規(guī)律進行定性與定量的分析。

分析微生物菌群結構的方法：

所述分析的微生物菌群結構為多微生物發(fā)酵系統(tǒng)的菌落結構，將樣品與無菌水混合后，樣品為大曲、小曲、酒醅、環(huán)境或其它發(fā)酵原料。稀釋涂布鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)：

（a）酵母鑒別培養(yǎng)基（g/L）：葡萄糖：20～80；酵母膏：5～10；蛋白胨：5～10；氯化鉀：0.1～0.5；氯化錳：0.001～0.01；氯化鈣：0.1～0.5；硫酸鎂：0.1～0.5；硫酸鐵：0.001～0.01；硫酸銅：0.02～0.05；百里酚藍：0.01～1；溴甲酚綠：0.01～1；瓊脂：15～20；4～30℃培養(yǎng)2～6天；

（b）細菌鑒別培養(yǎng)基（g/L）：牛肉膏：5～10；酵母膏：10～20；蛋白胨：10～30；氯化鈉：5～10；硫酸鐵：0.001～0.01；氯化錳：0.001～0.01；瓊脂：15～20；溴甲酚紫：0.01～0.5；25～37℃培養(yǎng)1～3天；

（c）霉菌鑒別培養(yǎng)基（g/L）：牛肉膏：5～10；蛋白胨：5～10；葡萄糖10～50；硫酸鎂：0.5～1.0；硫酸錳：0.001～0.01；孟加拉紅：0.01～0.5；溴酚紅：0.01～0.5；氯霉素：0.01～0.5；瓊脂：15～20；25～35℃培養(yǎng)2～5天。

分析微生物菌群結構的方法，包括如下鑒別步驟：

（1）建立酵母、細菌、霉菌三類微生物的種屬與其在鑒別培養(yǎng)基上的特殊菌落形態(tài)之間的對應關系。

微生物種屬鑒別方法如下：對鑒別培養(yǎng)基上具有不同菌落形態(tài)的微生物，采用分子方法對酵母、細菌、霉菌三類微生物進行種屬鑒定，其中，對酵母26srDNA序列，細菌16srDNA序列，霉菌18srDNA序列進行測序并與數(shù)據(jù)庫比對，建立鑒定微生物的種屬的對應關系。

（2）通過微生物在鑒別培養(yǎng)基上的形態(tài)來鑒別微生物的種屬；