[發明專利]高產安絲菌素發酵工藝

有效

• 申請號: 201210453649.X
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN103805648B
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 董清風;譚炳華
• 申請（專利權）人: 百奧泰生物科技（廣州）有限公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C07D498/18;C12R1/01
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司11285
• 代理人: 張廣育,姜建成

1.一種安絲菌素高效發酵工藝，其特征在于，首先進行補料分批發酵，隨后轉換為重復補料分批發酵，其中，在補料分批發酵階段，使用發酵培養基發酵一段時間后，向發酵液中加入異丁醇，繼續發酵一段時間后，向發酵液中流加葡萄糖；繼續發酵一段時間后，進入重復補料分批發酵階段，放掉發酵液的一部分，補加發酵培養基并向發酵液中加入異丁醇，一段時間后，向發酵液中流加葡萄糖。

2.如權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于，在補料分批發酵階段，使用發酵培養基發酵2～3天后，向發酵液中加入0.10～0.30％(v/v)的異丁醇，發酵進行4～6天后，向發酵液中流加葡萄糖，流加速率為3～10g/L/d；發酵進行8～12天后，進入重復補料分批發酵階段，放掉發酵液的30～50％，補加發酵培養基并向發酵液中加入0.10～0.30％(v/v)的異丁醇，在重復補料分批發酵階段開始2～4天后，向發酵液中流加葡萄糖，流加速率為3～10g/L/d，重復補料分批發酵階段持續時間為7～10天。

3.如權利要求1所述的發酵工藝，其參數為，接種量為發酵培養基的0.3％～10.0％(v/v)，溫度25～30℃，pH 6.8～7.6，DO(溶氧)40％～60％，壓力0.03～0.08MPa，通氣量0.1～0.6VVM(air volume/culture volume/min，通氣比)，攪拌速度100～300rpm。

4.如權利要求3所述的發酵工藝，其參數為，接種量為發酵培養基的6.0％(v/v)，溫度28℃，pH 7.3，DO 40％，壓力0.05MPa，通氣量0.4VVM，攪拌速度160rpm。

5.如權利要求1所述的發酵工藝，其特征在于使用的發酵菌種為珍貴橙色束絲放線菌(Actinosynnema Pretiosum)ATCC 31565及其衍生菌株。

6.如權利要求1所述的發酵工藝，其還包括在發酵完成后，用水溶性提取試劑從發酵液中純化安絲菌素，具體地包括如下步驟：

(1)滅活發酵液中微生物；

(2)向發酵液中加入50％～80％提取試劑，實現安絲菌素的抽提及去除固形物；

(3)通過離心或過濾去除菌體及固形物，得到發酵上清液，接著向上清液中加入0.1％～0.3％(質量比)的絮凝劑，靜置6～16h，以去除殘留物，其中采用的絮凝劑選自硫酸鋁、氯化鐵及硫酸鋁鉀中的一種或其混合；

(4)采用硅膠層析手段，實現初步分離發酵液中安絲菌素；

(5)采取蒸發的方法濃縮安絲菌素；

(6)采取高效液相色譜的方法精制安絲菌素。

7.如權利要求6所述的發酵工藝，所述提取試劑是醇類及酸酯類中的一種或其混合，其中醇類選自甲醇、乙醇、丙醇的一種或其混合，酸酯類選自乙酸乙酯、乙酸丁酯、丙酸乙酯的一種或其混合。

8.如權利要求1-7任一項所述的發酵工藝，其中在所述發酵培養基中，碳源為0.3％～4.0％葡萄糖和0.2％～2.0％糊精的混合；氮源為0.3％～3.0％玉米漿、0.1％～0.5％甘氨酸及0.1％～0.5％纈氨酸的混合。

9.如權利要求8所述的發酵工藝，其中在所述發酵培養基中，所述碳源為2.6％葡萄糖和1.5％糊精的混合；所述氮源為1.0％玉米漿、0.2％甘氨酸及0.2％纈氨酸的混合。

10.如權利要求8所述的發酵工藝，其中所述發酵培養基還含有0.1％～1.0％CaCl₂·2H₂O、0.1％～1.0％KH₂PO₄、0.1％～1.2％NH₃·H₂O及0.01％～0.3％消泡劑。

11.如權利要求10所述的發酵工藝，其中CaCl₂·2H₂O含量為0.5％，KH₂PO₄含量為0.2％，NH₃·H₂O含量為0.15％，消泡劑含量為0.05％。