[發明專利]灰樹花深層發酵的菌絲體揮發油的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201210452706.2
• 申請日: 2012-11-13
• 公開（公告）號: CN103131537A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 郭國寧;張耀華;陳義坤;岳海波;劉冰
• 申請（專利權）人: 湖北中煙工業有限責任公司;武漢市黃鶴樓科技園有限公司
• 主分類號: C11B9/00
• 分類號: C11B9/00;A24B15/20
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

技術領域

本發明屬于香料加工領域，具體涉及一種灰樹花深層發酵的菌絲體揮發油的制備方法及其應用。?

背景技術

擔子菌（Basidiomycetes）是不同于植物、動物的一類重要高等真核生物，資源極其豐富，包括灰樹花、茯苓、香菇、靈芝等重要的珍稀藥用菌。擔子菌可以產生一系列多樣性極為豐富的香味化合物。曾有研究報道利用香菇為原料可開發天然煙用香料，這表明擔子菌有望成為天然煙用香料的新來源。然而，由于大多數擔子菌栽培極為困難，產量低，因此在香料行業中的應用并不多見。?

灰樹花(Griflola?frondosa)隸屬擔子菌亞門，層菌綱-無隔擔子菌亞綱，非褶菌目，多孔菌科，樹花菌屬，又名貝葉多孔菌、栗子蘑、蓮花菌，是一種食、藥兼用的珍稀擔子菌，作為一種名貴食材，在亞洲地區尤其在日本受到普遍歡迎，具有調節肝功能、調節免疫、抗氧化、抗腫瘤及抗HIV病毒等作用。一直以來，灰樹花菌絲體中的多糖、多酚等抗氧化活性成分受到研究者的廣泛關注，而對灰樹花揮發性香味成分的研究較少，其在卷煙中加香的應用尚未見報道。?

盡管上世紀七十年代以來，灰樹花已實現人工栽培，但產量不高，價格昂貴，因而很難成為工業生產的原料來源。菌絲體深層發酵（Submerged?Fermentation,?SmF）技術是一種快速獲取擔子菌原料的生物技術，具有生產周期短、易于大規模生產及產品質量穩定等優點，是替代栽培原料的一個有效途徑。利用深層發酵技術獲取灰樹花煙用添加劑，原料來源不受季節、氣候等自然因素的影響，保證原料來源的穩定性，而且成本低廉，為擔子菌煙用添加劑的工業化應用奠定了基礎。?

發明內容

本發明目的是針對現有技術的上述不足，提出了一種灰樹花深層發酵的菌絲體揮發油的制備方法及其應用。?

為解決上述技術問題，本發明所設計的一種灰樹花深層發酵的菌絲體揮發油的制備方法，包括以下步驟：?

1）將灰樹花子實體在無菌條件下從菌柄部位剪取小塊組織片段，接種于分離瓊脂平板，在溫度28℃靜置培養7天，待菌絲長滿平板后，在無菌條件下用接種鉤挑取帶有菌絲的瓊脂3~5塊，接種至種子培養基，在溫度28℃，轉速150r/min條件下，培養7d，得到灰樹花接種物；?

2）按體積比5~15%將灰樹花接種物接種于發酵培養基，在溫度26~30℃，通氣量為0.8~1.0dm³/min，轉速120~150r/min條件下，培養4~7d，進行深層發酵，獲得灰樹花菌絲體發酵產物；?

3）按體積比1∶1~3將灰樹花菌絲體發酵產物，加入蒸餾萃取裝置一端容器中，裝置的另一端容器中按體積比1∶1~3裝有二氯甲烷，50~60℃水浴加熱，同時蒸餾萃取4~8h，得到提取液；?

4）將步驟3）中提取液真空濃縮至體積不再發生變化，溶劑全部揮發時停止濃縮，用無水硫酸鈉進行干燥，放置2~5h小時后過濾，即得到灰樹花深層發酵的菌絲體揮發油。?

進一步地，所述的步驟1）中，分離瓊脂平板配方為：馬鈴薯：200g/L，蔗糖：20g/L，瓊脂粉：30g/L。?

再進一步地，所述的步驟1）中，種子培養基配方為：馬鈴薯：200g/L，蔗糖：20g/L。?

再進一步地，所述的步驟1）中，發酵培養基的配方為：馬鈴薯：200g/L，麩皮8g/L，蔗糖20g/L，硫酸錳2.5g/L，硫酸鎂1.5g/L。?

本發明還提供了一種所述的灰樹花深層發酵的菌絲體揮發油的應用，其特征在于：所述的灰樹花深層發酵的菌絲體揮發油作為天然煙草添加劑加入重組煙葉中，加入重組煙葉中質量比為0.01～0.5‰。?

本發明的優點是：?

本發明方法簡單，實施容易，來源穩定，成本低廉，應用到卷煙中，產生良好的加香效果。

具體實施方式

下面列舉一部分實施例對本發明的有關技術問題作進一步詳細的描述，有必要在此指出以下具體實施例只是對本發明的進一步說明，不代表對本發明保護范圍的限制。其他人根據本發明做出的一些非本質的修改和調整，仍屬于本發明的保護范圍。?

實施例1?

1）將灰樹花子實體在無菌條件下從菌柄部位剪取小塊組織片段，接種于分離瓊脂平板，在溫度28℃靜置培養7天，待菌絲長滿平板后，在無菌條件下用接種鉤挑取帶有菌絲的瓊脂3塊，接種至種子培養基，在溫度28℃，轉速150r/min條件下，培養7d，得到灰樹花接種物；?