[發明專利]一種使醋桿菌種富集鈣的馴化培養方法

有效

• 申請號: 201210451563.3
• 申請日: 2012-11-12
• 公開（公告）號: CN102899279A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 張起凡;曹崇仁
• 申請（專利權）人: 濟南環億生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/02
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 苗峻

技術領域

本發明涉及生物制品技術領域，具體涉及一種使醋桿菌種富集鈣的馴化培養方法。

背景技術

鈣是人體的生命之源，是人體骨骼的主要成份，是人體不可缺少的微量元素，人生各個階段都必須注重鈣的攝入和吸收。人體一旦缺鈣，便會導致牙齦出血，皮下出血點，骨質疏松等現象，而且鈣離子對人體內分泌腺激素的分泌有決定性的作用，對呼吸、消化、泌尿、神經、內分泌、生殖等系統器官的功能至關重要，鈣既是身體的構造者，又是身體的調解者。

人類通過食物來攝取身體所需的鈣元素，通常成年人每天攝入的鈣約為450-500毫克，然而人體代謝過程中每天大約要排出700-800毫克的鈣，為維持身體的收支平衡，補鈣已引起全民重視。如何提高飲食中的鈣含量已經成為不可忽視的問題，現有的補鈣產品眾多，其中無機鈣價格低廉，但是其吸收效率底下，難以與常規食品配合食用；其他采用有機鈣的補鈣產品雖然吸收效果較好，但是由于其制備方法較為苛刻，使其成本較高，難以廣泛的推廣應用，無法滿足普通民眾對于鈣源的需求；一般的發酵菌種中含鈣量較低，直接應用于食品加工和飼料加工時所能提供的有機鈣源少，無法滿足生產的要求，同時越來越多的科研表明通過馴化等手段可以改變菌種的某些特性，但是如何將馴化這一培養方式應用于富集鈣的生產實踐中一直是難以突破的技術難題。

發明內容

本發明針對現有技術存在的不足之處，提供了一種使醋桿菌種富集鈣的馴化培養方法，該方法采用常用的巴氏醋桿菌，通過改變培養基配比和培養方法，使得現有的巴氏醋桿菌可以實現鈣的富集，進而獲得高鈣含量的菌體和菌液，該菌體和菌液可以用于多種飼料添加劑中，應用到禽畜飼養中時可以大大提高畜禽體內的鈣含量，促進畜禽的生長，改善禽畜肉類產品的品質。

本發明的具體技術方案是：具體步驟如下：

（1）馴化初級菌液的制備

取500ml三角瓶，每瓶裝馴化培養液150ml；滅菌后在30±1℃和無菌條件下，向每個三角瓶中接入醋桿菌0.1g，將三角瓶密封，放入回旋式搖床中培養，轉速90－110rpm，溫度30±1℃，培養45小時結束即可獲得馴化初級菌液；其中所述的馴化培養液為：

牛肉膏4g，碳酸鈣30g，磷酸二氫鈣25g，玉米粉10g，無水氯化鈣0.3g，磷酸二氫鉀0.25g，玉米漿干粉5g，葡萄糖15g，加水1000ml后混合均勻既得；

所述的醋桿菌選自中科院微生物研究所提供的巴氏醋桿菌，編號為：Accc10600或Accc?10112；

（2）一級種子液的制備：

取250ml三角瓶，每瓶裝培養液100ml，滅菌后在30℃±1℃和無菌條件下，每個三角瓶接入步驟（1）中獲得的馴化初級菌液10ml，將三角瓶密封，放入回旋式搖床中培養，轉速每分鐘120-130轉，溫度30℃-32℃，培養25-30小時既得一級種子液；其中所述的培養液中各組分的重量百分比為：酪蛋白胨5％，牛肉膏5％，碳酸鈣3％，磷酸氫鈣2％，玉米粉2％，磷酸二氫鉀0.3％，玉米漿干粉0.4％，葡萄糖2.3％，水80％；

（3）種子罐培養菌種液的獲得：

將種子罐培養液加入到已經滅菌的種子罐中，然后通入蒸氣加熱，利用夾層蒸氣加熱到90℃-95℃時改用直接蒸氣加熱，當種子罐中蒸氣壓力達到0.11-0.12兆帕時，保溫25-30分鐘即可達到滅菌效果；然后關閉蒸氣，待種子罐降溫至28℃-30℃之間時，將步驟（2）中獲得的一級種子液按照種子罐培養液重量1%的用量加入到種子罐中，然后蓋好接種帽，開始無菌空氣通風發酵，無菌空氣用量為每100公斤培養液每分鐘用無菌空氣0.05-0.1立方，pH值自然，轉速每分鐘120-130轉，發酵時間為25-30小時，檢測OD值應達到0.1毫升，OD600mm＝1即可停止發酵，獲得種子罐培養菌種液；

其中所述的種子罐培養液中各組分的重量百分比為：酪蛋白胨3％，牛肉膏3.5％，葡萄糖0.5％，酵母膏3％，碳酸鈣2％，磷酸氫鈣1％，玉米粉1％，磷酸二氫鉀0.2％，玉米漿干粉0.2％，水85.6%；

（4）發酵罐培養：