[發(fā)明專利]一種使醋桿菌種富集鈣的馴化培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210451563.3
• 申請日: 2012-11-12
• 公開（公告）號: CN102899279A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張起凡;曹崇仁
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南環(huán)億生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/02
• 代理公司: 濟(jì)南舜源專利事務(wù)所有限公司 37205
• 代理人: 苗峻

1.一種使醋桿菌種富集鈣的馴化培養(yǎng)方法，其特征在于：具體步驟如下：

（1）馴化初級菌液的制備

取500ml三角瓶，每瓶裝馴化培養(yǎng)液150ml；滅菌后在30±1℃和無菌條件下，向每個(gè)三角瓶中接入醋桿菌0.1g，將三角瓶密封，放入回旋式搖床中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速90－110rpm，溫度30±1℃，培養(yǎng)45小時(shí)結(jié)束即可獲得馴化初級菌液；其中所述的馴化培養(yǎng)液為：

牛肉膏4g，碳酸鈣30g，磷酸二氫鈣25g，玉米粉10g，無水氯化鈣0.3g，磷酸二氫鉀0.25g，玉米漿干粉5g，葡萄糖15g，加水1000ml后混合均勻既得；

所述的醋桿菌選自中科院微生物研究所提供的巴氏醋桿菌，編號為：Accc10600或Accc?10112；

（2）一級種子液的制備：

取250ml三角瓶，每瓶裝培養(yǎng)液100ml，滅菌后在30℃±1℃和無菌條件下，每個(gè)三角瓶接入步驟（1）中獲得的馴化初級菌液10ml，將三角瓶密封，放入回旋式搖床中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速每分鐘120-130轉(zhuǎn)，溫度30℃-32℃，培養(yǎng)25-30小時(shí)既得一級種子液；其中所述的培養(yǎng)液中各組分的重量百分比為：酪蛋白胨5％，牛肉膏5％，碳酸鈣3％，磷酸氫鈣2％，玉米粉2％，磷酸二氫鉀0.3％，玉米漿干粉0.4％，葡萄糖2.3％，水80％；

（3）種子罐培養(yǎng)菌種液的獲得：

將種子罐培養(yǎng)液加入到已經(jīng)滅菌的種子罐中，然后通入蒸氣加熱，利用夾層蒸氣加熱到90℃-95℃時(shí)改用直接蒸氣加熱，當(dāng)種子罐中蒸氣壓力達(dá)到0.11-0.12兆帕?xí)r，保溫25-30分鐘即可達(dá)到滅菌效果；然后關(guān)閉蒸氣，待種子罐降溫至28℃-30℃之間時(shí)，將步驟（2）中獲得的一級種子液按照種子罐培養(yǎng)液重量1%的用量加入到種子罐中，然后蓋好接種帽，開始無菌空氣通風(fēng)發(fā)酵，無菌空氣用量為每100公斤培養(yǎng)液每分鐘用無菌空氣0.05-0.1立方，PH值自然，轉(zhuǎn)速每分鐘120-130轉(zhuǎn)，發(fā)酵時(shí)間為25-30小時(shí)，檢測OD值應(yīng)達(dá)到0.1毫升，OD600mm＝1即可停止發(fā)酵，獲得種子罐培養(yǎng)菌種液；

其中所述的種子罐培養(yǎng)液中各組分的重量百分比為：酪蛋白胨3％，牛肉膏3.5％，葡萄糖0.5％，酵母膏3％，碳酸鈣2％，磷酸氫鈣1％，玉米粉1％，磷酸二氫鉀0.2％，玉米漿干粉0.2％，水85.6%；

（4）發(fā)酵罐培養(yǎng)：

將發(fā)酵罐培養(yǎng)液加入到已經(jīng)滅菌的發(fā)酵罐中，通入蒸氣加熱，當(dāng)發(fā)酵罐中蒸氣壓力達(dá)到0.11-0.12兆帕?xí)r，溫度121℃-122℃時(shí)，保溫30-35分鐘即可達(dá)到滅菌效果；然后向夾層通入自來水降溫，當(dāng)罐中溫度降到30℃-31℃時(shí)，無菌條件下接入發(fā)酵罐培養(yǎng)液重量3%的步驟（3）中獲得的種子罐培養(yǎng)菌種液，接種時(shí)首先提高種子罐的罐壓力，達(dá)到0.1兆帕，發(fā)酵罐罐壓維持在0.05兆帕，打開接種管道的閥門將種子罐的菌種液直接輸送到發(fā)酵罐中去，輸送到上述定量的菌液后關(guān)閉接種管道閥門開始發(fā)酵；發(fā)酵溫度30℃-31℃，轉(zhuǎn)速每分鐘150轉(zhuǎn)，通風(fēng)量每100公斤發(fā)酵液每分鐘通入無菌空氣0.1立方米，ph自然，發(fā)酵時(shí)間25-30小時(shí)，檢測OD值應(yīng)達(dá)到0.1毫升，OD600mm＝1為合格，既得目標(biāo)發(fā)酵菌液；

其中所述的發(fā)酵罐培養(yǎng)液中各組分的重量百分比為：酪蛋白胨4％，牛肉膏3％，酵母膏2.5％，葡萄糖3％，碳酸鈣5％，磷酸氫鈣3.5％，玉米粉3％，磷酸二氫鉀0.3％，玉米漿干粉0.7％，乳酸鈉2％，水73％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馴化方法，其特征是：所述步驟（1）中的滅菌方法為：

將裝有馴化培養(yǎng)液的三角瓶口用八層紗布密封，放入醫(yī)用蒸汽消毒器中滅菌，當(dāng)蒸汽壓力達(dá)到0.05兆帕?xí)r，打開消毒器上的排氣閥門，當(dāng)消毒器上的壓力表歸零時(shí)，關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加溫。當(dāng)消毒器中的蒸汽壓力達(dá)到0.11兆帕?xí)r，保持30分鐘，然后將消毒器離開加熱源讓其自然降溫，當(dāng)消毒器上的壓力表指向零時(shí)，滅菌完成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馴化方法，其特征是：所述步驟（2）中一級種子液的制備中的滅菌方法為：

將裝有培養(yǎng)液的三角瓶瓶口密封，放入高壓消毒器蒸氣滅菌；當(dāng)蒸氣壓力達(dá)到0.05兆帕?xí)r，打開消毒器上的排氣閥排氣，當(dāng)消毒器上的壓力表歸零時(shí)，關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加溫，當(dāng)消毒器中的蒸氣壓力達(dá)到0.11兆帕?xí)r保持25分鐘；然后將消毒器離開加熱源讓其自然降溫，當(dāng)消毒器上的壓力表指向零時(shí)滅菌完成。

4.應(yīng)用權(quán)利要求1所述使醋桿菌種富集鈣的馴化培養(yǎng)方法獲得的菌體和菌液，在制備畜禽飼料中的應(yīng)用。